-
它還可以誘導蛋白質,我以前在實驗中遇到過類似的情況。
之所以在誘導階段加入IPTG,是為了儘量減少大量表達蛋白(通常需要表達的蛋白也是工程菌不需要的)對細胞生長的影響,從而促進所需細胞濃度的早日到來, 有利於誘導階段大量蛋白質的表達。一般來說,題主提到的問題可能會對細胞的生長速度產生影響,一些比較敏感的蛋白質可能會形成包涵體。
或者濃度發生變化,但蛋白質表達應該沒問題。
但建議最好在提取蛋白質時進行測試,如果濃度或溶解度不符合要求,應盡快丟棄,並重新誘導,以免影響實驗。
-
在擴充套件時直接新增 IPTG 可能會導致一些問題。 IPTG是一種可以誘導細菌表達外源蛋白的誘導劑,但其新增需要在誘導階段進行,而不是在繁殖階段進行。
在繁殖時加入IPTG可能會影響細胞的生長速度,一些更敏感的蛋白質可能會形成包涵體或改變濃度。 如果濃度或溶解度不理想,可能會影響實驗結果。 因此,建議在誘導階段新增IPTG,以保證蛋白表達的效率和穩定性。
-
一般是配製好的Amp+LB板,包衣板時,向菌液中加入X-GAL 40UL(20mg ml)和IPTG 4UL(200mg ml),然後混合板。 在施用細菌之前,也可以先將其塗在板上。
在製備培養基時,一般不直接新增X-gal和IPTG,這確實存在浪費的問題,因為細菌只生長在板的表面。
-
大腸桿菌培養表達一般是在前期分子轉殖工作完成後進行的,此時,從平板中挑出的單轉殖菌將首先轉移到體積相對較小的培養基中,一般為100ml左右。 由於使用的LB培養基營養較少,因此有必要將燒瓶搖勻過夜,以使細菌生長到足夠的量。 然後將其轉移到更大體積的培養基中並重新孵育。
當細菌體積與對數相成比例快速增長時,可以用IPTG誘導。
因此,據說振盪細菌過夜的目的是為了讓細菌大量生長,而轉移是為了擴大培養體積以獲得更多的代謝產物。
-
我沒有做過莢膜紅細胞,但我知道IPTG對細胞有一定的毒性,使細胞幾乎不複製,而是表達並產生大量的蛋白質,所以培養基中的細菌數量不會增加太多,但不清楚是否會變得清晰, 這可能是判斷錯誤。
-
IPTG中文稱為異丙基--D-硫代半乳糖苷,通常用水或20%儲備液製備。
它可以在-20攝氏度下長期儲存。 但是我們也可以在4度下使用幾個星期,比較穩定。
希望對你有所幫助!
-
就我個人而言,我覺得它被噬菌體汙染了。 當我進行質粒擴增時,我也遇到了OD的下降,但OD上公升得很慢,達到了最高點。 你表達什麼蛋白質?
-
如果我們星球上的人們無限增長,會發生什麼; 菌株之間釋放抑制,10小時後,一些菌株被消除,其餘的菌株被營養物質完全吸收。
達爾文的演化論。 半衰期再次恢復。
-
加點水或液體試試,我不能保證。 給一分!!
-
是的。。 如果您的洗脫液為 1L,則加入氯化鈉。
水溶液的密度為1. 所以。。。 明白了。