多種色譜洗脫規則，簡明扼要

HPLC根據固定相和流動相的相對極性分為正相色譜和反相色譜。

在正相中，流動相的極性小於固定相的極性，保留了極性成分，峰序為非極性->弱極性->性。

反相色譜流動相的極性大於固定相，常用的固定相是C8-C18，非極性成分最後流出，峰次數為：極性->弱極性->非極性，反相色譜由於對組分沒有很強的作用，組分不會長時間停留在汙染柱中， 而反相色譜法則以水為底溶劑，混合乙腈等其他弱極性和非極性溶劑等有機物，改變流動相的極性，達到分離的目的，水的紫外吸收和遏制波長低，不會干擾檢測， 而且水很容易廉價獲得。

還有一點需要注意：分離大量物質中的雜質時，應先放出含量小的雜質，如果大量的成分先流出，就會拖尾，造成不純雜質分離。

氣相色譜法沒什麼好說的，原理差不多，主要是保留時間、峰寬、校正因子。

毛細管電泳，一般毛細管壁被修飾為帶負電荷，電滲流速大於電泳速率，正負離子，中性分子向陰極移動，檢測順序為：正離子->中性分子->負離子。

樓上說的不準確，正負相色譜法。

在液相中，只涉及兩種型別，即液-固和液-液。

高效液相色譜。

主要有四種型別，如下所示。

1。液固吸附色譜法。 固定相是一種固體吸附劑，根據固定相中物質吸附的差異進行分離。 吸附力越強，k值越高。

它越大，保留的時間就越長。

2。液-液分配色譜法。 顧名思義，它是將固定溶液作為固定相應用於支撐體，其分離原理類似於液-液萃取。

從而遵守分配法則。 在固定液中的溶解度。

k值大，保留時間長。

對於反相色譜，物質的極性越小，流動相的極性越大，保留時間越長。 物質極性越小，流動相極性越小，保留時間越短。 對於高極性物質，流動相的極性對其保留時間影響不大。

正相色譜法則相反。

3。離子交換色譜法。 它是離子交換樹脂上的可電離離子與帶相同電荷的分析物之間的可逆交換，因為被測離子在不同的交換劑上具有不同的親和力。

親和力越強，k值越大，保留時間越長。

4。排阻色譜法。 固定相為多孔凝膠，內部有孔隙，大於孔隙的分子無法進入固定相，直接從表面流出，幾乎沒有滯留，小分子物質可以自由進出孔隙而不受任何阻礙，保留時間長。

中等體積的分子介於兩者之間。 分離順序僅與分子的大小有關。

使用高效液相色譜法進行分析時，常用兩種洗脫方法，一種是等度洗脫，另一種是梯度洗脫。

在等度洗脫的色譜分離中，由不同溶劑組成的流動相的組成，如流動相的極性、離子強度和pH值，在整個分離過程中保持不變。 在梯度洗脫的色譜分離中，含有兩種或兩種以上不同極性溶劑的流動相的組成在洗脫過程中連續或間歇變化，在此期間可以調整流動相的極性以提高樣品中組分之間的分離度。

當使用梯度洗脫時，干擾分離的強殘留雜質也會在更短的時間內從色譜柱中清除，使色譜柱保持清潔，以便進行下一次分析。 梯度洗脫一般是指流動相組成隨分析時間的延長而發生的線性變化，即線性梯度洗脫，可用於反相和正相高效液相色譜和離子對色譜。

根據您的樣品成分的極性，還取決於您使用的是正相色譜柱還是反相色譜柱，如果您使用反相色譜柱（C8、C18等），並且色譜柱填料的極性較弱，則被分析的物質是極性最高的第一峰; 如果使用正向色譜柱（CN，NH2），並且色譜柱填料的極性較強，則被分析的物質是第乙個極性較小的峰。

液相色譜的原理多是分層析，即樣品被固定相（柱填料）吸附後，在流動相洗脫過程中，樣品的極性不同，流動相中溶解的濃度也不同，有的可以混溶，有的不能混溶，有的有一定的溶解度。 根據這個原則可以分開。 在與固定相長時間相互作用後，它被洗脫，未吸附的首先隨著流動相的流動洗脫。

RF值越高，化合物在流動相上傳播的距離越遠，表明化合物先洗脫，後流動相先洗脫，即RF值越大，先洗脫，反之，RF值越小，後洗脫。 明白了

梯度洗脫使用弱極性溶劑A和強極性溶劑B進行。

梯度洗脫原理：

流動相由幾種不同極性的溶劑組成，通過改變流動相中每種溶劑與銀成分的比例來改變流動相的極性，使每個流動的基團寬度和無序性具有適合的容量因子k'並在最短的時間內實現樣品種類的所有組分的最佳分離。

梯度洗脫特性：

當樣品在其中乙個峰中達到k高時，提高色譜柱效率並改善檢測器靈敏度'最後乙個峰值的值和 K'當值相差幾十到幾百倍時，梯度洗脫特別有效。 在梯度洗脫中，必須使用恆流幫浦來保證穩定的流速，否則很難獲得可重複的結果。

梯度洗脫的優點：1縮短分析週期; 2.提高分離能力; 3.峰形得到改善，拖尾少; 4.提高靈敏度。 但是，它有時會導致基線漂移。

梯度洗脫適用於分析不易分離的複雜組分。