什麼是直接測序，什麼是下一代測序技術？

首先，含義不同：

第一代測序：指雙脫氧末端終止法，其中序列在放大後通過毛細管電泳讀取，每次獲得的資料量較小。

第二代測序：對於高通量測序，採用珠子或高密度晶元同時合成測序，代表454、solexa、solid、高通量，一次可獲得數g資料，相對於第三代，兩者仍需通過放大、放大再檢測等方式放大訊號。

二、作用不同：

Sanger 測序利用 DNA 聚合酶將與待定序列模板結合的引物延伸。 直到摻入鏈終止核苷酸。

普通的二代測序，全基因組或外顯子組測序，將DNA分裂成小片段，然後多次讀取每個片段（通常為30次）。 然而，如果突變只發生在15-20%的細胞中，那麼30個reads不足以可靠地捕獲它們，特別是如果突變只影響基因的乙個拷貝。

測序程式

向 4 個試管中的每乙個中加入適當的引物、模板、4 個 DNTP（包括放射性標記的 DNTP，例如 32 個 PDNTP 和 DNA 聚合酶（如果使用 RNA 作為模板，則為逆轉錄酶），並向 4 個試管中的每乙個新增濃度的 DDNTP（雙脫氧核苷酸）。

在DNA聚合酶的作用下，與單鏈模板結合的引物（例如，待變性的雙鏈模板）從5'端延伸到3'端，並且32P通過引物延伸摻入新的合成鏈中。 當摻入 DDNTP 時，它不會與下乙個 DNTP 結合，因為它在 3' 位置沒有羥基，從而終止了鏈伸長。 DDNTP被摻入不同的位置，從而產生一系列不同長度的新DNA鏈。

以上內容參考：百科全書-雙脫氧鏈終止方法。

下一代測序技術，也稱為高通量測序技術，是對傳統桑格測序（稱為下一代測序技術）的革命性變革。 下一代測序技術的核心思想是邊合成邊測序，可以一次並行測序數十萬到數百萬個DNA分子，因此也稱為深度測序。 下一代測序技術因其多樣本、多位點同時測序、覆蓋率高等優點，在生命科學領域得到了廣泛的應用。

將DNA化學訊號轉換為可由計算機處理的數碼訊號的過程。

測序技術現在已經發展到第三代，基本方法是通過各種物理或化學技術，如第一代測序的條帶、二代測序的螢光、第三代測序的電流訊號等，逐一讀出DNA序列。 第二代Hahashi測序是目前的主流技術。

如上圖所示，將4個正常DNA和4個DIA加入到大量待測序的單鏈中進行隨機反應，DIA時鏈式反應終止。 終止點可以位於序列上的任何位置。

因此，當反應充分時，待測序列的每個鹼基至少有乙個終止點（在雙脫氧核苷酸處）。

另一種操作方法是將四種雙脫氧核酸分別加入，這樣對於每個雙脫氧核酸樣品，電泳帶的位置就是序列上相應鹼基的位置。 如下圖所示。

DNA測序是單向測序的反映，單向測序是區分測量值的DNA測序的反映。

大約DAO可以測量800bp左右，如果測量的序列在800bp左右，那麼可以測量乙個反射，即測序完成;

如果序列大於800 bp，例如1500 bp，則需要兩次反應才能完成測序，並且兩次反應的測序中間有相同的部分，因此需要剪接。

如果是PCR，那麼由於測序原理，引物後面的序列是無法讀取的，在這種情況下，如果做單向測序，那麼第乙個引物後面的序列就不可用了，然後就需要從另一端進行測序，所以可以選擇通過測試。