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一般來說,從自然界或其他樣品中分離和純化的未知菌株的鑑定應從以下幾個方面進行。 觀察個體形態並進行革蘭氏染色。
區分 g(+) 和 g(-) 細菌。 觀察其形狀、大小、有無孢子及其位置等; 菌株的形態觀察主要觀察其形態、大小、邊緣、隆起、透明度、顏色、氣味等特徵。 做乙個動機測試,看看他是否可以移動他的鞭毛。
出生型別(端生、周生。
生理生化反應和血清學反應實驗。 最後,根據上述實驗專案的結果,查閱微生物分類檢索表,對未知細菌進行命名。
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如果你確定屬和種,你一定是世界的生物。
細菌的形態、染色、特殊結構是最早、最基本的分類標準; 細菌的生理生化特性一直被用作分類的主要依據。 目前,基於生理和生物化學的細菌分類有兩種廣泛應用的方法,即傳統分類和數字分類。 例如:
形狀,即:球菌、桿菌和螺旋體。 生活方式,分為兩大類:
自養和異養細菌。 對氧氣的需求分為好氧菌和厭氧菌。 生存溫度有三種型別:喜寒、常溫和高溫。
以及細菌結構的一些特點。 採用傳統的分類方法,根據上述特徵進行分類,在科、屬、種水平上的分類主要取決於生化特徵和抗原結構。
此外,它是遺傳分類法,根據組成中核酸、蛋白質等的同源程度對細菌進行分類。
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1 生化鑑定。
它是細菌鑑定中最重要的一種,主要借助細菌分解營養物質的能力不同和代謝產物的差異來鑑別細菌,包括蛋白質分解產物試驗、觸控酶試驗、糖分解產物試驗、氧化酶試驗、凝固酶試驗等。
2 血清學鑑定。
適用於血清型較多的細菌,常用方法是玻片凝集試驗,免疫螢光法、協同凝集試驗、對流免疫電泳、間接血凝試驗、酶聯免疫吸附試驗等方法,可快速靈敏地檢測樣品中病原菌的特異性抗原。 用已知抗體檢測未知抗原(待測細菌),或用已知抗原檢測患者血清中相應的抗菌抗體及其滴度。 血清學鑑定簡單、快速且特異性強,為基於生化鑑定的細菌鑑定提供了明確的診斷。
3 分子生物學測試。
適用於人工培養基中不能生長、生長緩慢、營養要求高的細菌,檢測方法包括核酸擴增技術、核酸雜交、生物晶元和基因測序等。 常見的核酸擴增技術包括聚合酶鏈反應(PCR)、連線酶鏈反應等,主要用於耐甲氧西林、結核分枝桿菌等病原菌的檢測。 核酸雜交包括斑點雜交、原位雜交等,用於檢測大腸桿菌、沙門氏菌、空腸彎曲桿菌等病原菌。
生物晶元包括基因晶元和蛋白質晶元,主要是對基因、蛋白質、細胞等生物進行大資訊分析的檢測技術。
4.通過自動微生物鑑定系統進行鑑定。
在臨床實踐中可快速準確地鑑定近1000種常見分離株,並已在臨床實驗室中得到廣泛應用。 其中,編碼細菌16S RNA的基因已成為基因分離的理想靶序列,並逐漸成為臨床細菌鑑定和分離的金標準。
5 質譜技術。
它是近年來發展起來的一種新型軟電離生物質光譜法,用於分析細菌的化學分類和鑑定,具有靈敏度高、檢測範圍大等優點。 主要用於核酸、蛋白質、多肽等生物大分子的串聯質譜分析。
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奈瑟菌是一種革蘭氏陰性球菌,最常見的是腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。
1.腦膜炎奈瑟菌。
1.生物學特性:革蘭氏陰性雙球菌,菌呈腎形或咖啡豆狀,營養要求高,能分解葡萄糖和麥芽糖,並產生酸而不產生氣體。
2.微生物檢測:
標本採集:大部分標本為腦脊液,細菌易自溶,怕冷怕熱怕高溫,故不宜放入冰箱,應立即送檢。
直接塗片:可發現革蘭氏陰性雙球菌呈腎形或咖啡豆狀。
分離培養:一般在巧克力培養基中培養,第一次分離置於5%10%CO2中,24小時後可見透明液滴狀菌落。
生化鑑別:分解葡萄糖和麥芽糖,產酸不產氣,氧化酶試驗陽性。
3.臨床意義:主要引起流行性腦膜炎(簡稱腦炎),冬春季多見,有一定的流行性。
2.淋病奈瑟菌。
1.生物學特徵:形態與腦膜炎奈瑟菌相似,類似於咖啡豆。
2.微生物檢測:
標本採集:膿性分泌物等,可自溶,應立即送檢。
直接塗片:革蘭氏陰性雙球菌,腎形或咖啡豆狀。
分離培養:一般在巧克力培養基中培養,初始分離並放置5%10%CO2,24小時後,可見圓形凸起的灰白色不透明菌落(鑑定自腦膜炎奈瑟菌)。
生化鑑別:葡萄糖分解,麥芽糖不分解,產酸不產氣(可與腦膜炎奈瑟菌鑑別)。
3.臨床意義:是淋病(性傳播疾病,易受泌尿生殖系統感染)的病原體。
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內容來源於使用者:於秀蘭。
菌株鑑定。 第 1 章:菌株鑑定。
中國工業微生物菌種採集管理中心.
中金公司是國內唯一的國家級工業微生物菌株採集管理中心,擁有近30年的菌株分類鑑定歷史,擁有先進的生物科學儀器和一支從事分類鑑定的專業人才隊伍。 中金公司承接我國工業微生物菌株鑑定工作,菌株鑑定評價提供的技術服務已獲得《國家工商行政管理總局營業執照》,為國內科研機構、高校、生產企業提供微生物菌株鑑定服務,涉及細菌、酵母菌、放線菌和絲狀真菌等微生物。菌株鑑定的方法包括形態觀察、生理生化特徵、Biolog碳源自動分析鑑定、分子生物學鑑定、原料藥細菌數值鑑定、功能分析及功能基因、RAPD、SSCP、TLC薄層色譜、全細胞脂肪酸分析鑑定、(G C)mol測定、DNA DNA同源測定等。
專案標識。 序列號:服務專案,文化類別。
1. 純菌株(包括形態、理化和分子)細菌、酵母菌、放線菌、絲狀真菌的鑑定, 2.功能基因(PHES、GRYA、ATPD等)的鑑定乳酸桿菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌 3
4. 產品汙染菌株的鑑定
5. 純品種的微生物群分析與分離
6. 細胞壁化學成分(氨基酸)細菌、放線菌的分析 7.分析細胞壁化學成分(糖)細菌、放線菌。
8 DNA(g+C)mol含量:細菌、放線菌、9 DNA、DNA、雜交菌、酵母菌、放線菌、絲狀真菌、10 種脂肪酸、細菌、放線菌、cicccicc
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首先,您需要確保要鑑定的菌株必須是純的。 如果培養物不純,觀察到的現象是混合現象,自然不會給出正確的結果。 因此,在鑑定之前,必須首先對菌株進行純化。
純化方法一般有兩種:平板劃線單菌落分離法和單細胞分離法。 前者操作方便,效果好,應用範圍廣。
菌株鑑定方法一般包括常規鑑定和分子生物學方法
1)常規鑑定:菌落形態觀察、革蘭氏染色、菌毛染色、碳水化合物分解實驗、吲哚實驗、澱粉水解實驗、V-P實驗、甲基紅實驗、檸檬酸鹽利用實驗、硝酸鹽還原實驗、接觸酶實驗等。
2)分子生物學方法:細菌16srdna物種鑑定:DNA提取、特異性引物PCR擴增、PCR產物純化測序、系統發育樹分析;真菌 18S rdDNA ITS 的鑑定也是如此。
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傳統的細菌做白的方法
革蘭氏染色、運動測試、各種代謝,然後是 Chaberger 的細菌手冊; 如果使用huigo,則回答總DNA,通過PCR擴增16個srdna的全長片段,與NCBI資料庫進行比較,並通過選擇密切相關的序列構建系統發育樹鑑定。
就真菌而言,它們主要通過形態學來鑑定,尤其是有性生殖形態學; 就分子而言,ITS區域通常被擴增、比較和鑑定。
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首先確定物種。
1.選擇性培養基做出一般判斷(如SS-志賀鮭魚、ECCA---大腸、HE---許多細菌、鹼蛋白腖、水---霍亂。 根據菌落的形態大小和生長情況,其實這一步也是為了淨化細菌,但細菌的方向大概是確定的,對下一步生化反應的選擇也有幫助;
2.平板上的菌落可以與生命反應以進行進一步驗證,例如,起亞二糖、氧化酶反應、VP 運動性測試。
3.如果以上與細菌的生化特性一致,則可以進行血清鑑定,即可鑑定屬。
確定屬 4此時,血清型可以通過血清來識別,即屬。
這個普通的微生物學實驗室是有條件的。
以上步驟也可以用生化板條來完成,比如api20,價格會貴一點,但速度會快得多。
如果有條件的話,有生物酶標儀,是軍事科學院的新產品,可以直接製造細菌的種類,有點貴。
當然,PCR仍然是最快的方法,但因為是未知細菌,沒有範圍,而且也很麻煩,所以引物要準備得更多。
我樓上說的塗片現在用得少了,麻煩就死了,除非你經驗比較多,一下子就能看出來,否則只能看出是球菌、弧菌、桿菌,沒有多大意義。
但是如果你檢測到目標,你可以檢查國家標準,這幾乎是幾個步驟。
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首先要確定是否為純菌落,菌落形態的巨集觀檢視,邊緣是否有凹槽,是凸的還是扁平的,正反面的顏色,然後染色顯微鏡。 真菌觀察菌絲,看看是否有隔膜、孢子莖、假根、孢子穗等。 細菌染色通常用革蘭氏染色劑進行,以檢視它是桿菌、球菌還是弧菌。
完成這些任務後,進行生理生化測試,這樣基本上可以鑑定出該屬。 要鑑定物種,一定要拿去測序,細菌檢測16個srna,真菌檢測18個srna,有條件的實驗室可以自己檢測,沒有條件可以送到專門機構檢測,一般不貴,十多元乙個鹼基。
希望對你有所幫助。
我同意網友“第三人稱”的觀點,我的方法比較傳統和經典。 您的方法更快、更高效。
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你問的問題確實太大了,無法詳細描述,我只能簡單說一下:
首先,您需要確定您的菌株生長需要什麼條件,厭氧或好氧等,然後選擇合適的培養基進行分離和培養(如果細菌含量低,那麼您還需要增加細菌)。 然後在平板上選擇可疑菌落進行生化鑑定,這時需要根據菌落形態、革蘭氏染色等進行判斷,然後根據生化反應的結果判斷你挑選的菌落是哪種細菌。
顯然,最困難的一步是最後一步,現在一般用來識別細菌鑑定板條中有哪些細菌(手動或儀器),乙個板條有很多生化項,從所有生化項的結果中得出一組程式碼,由程式碼查詢。
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根據細菌的生物化學來做。
有些可以用小葉子、小樹枝和扦插到土壤中種植。 生根速度非常快,沒有科技含量,沒有難度因素,在家裡養一些花草樹木,可以使我們的生活狀態更加幸福舒適,讓家變得越來越溫馨舒適。 >>>More
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