高效液相色譜的原理及其使用方法

高效液相色譜是色譜的乙個重要分支，以液體為流動相，採用高壓輸注系統，將不同極性或不同比例的單一溶劑、緩衝液等流動相幫浦入裝有固定相的色譜柱中，分離柱內各組分後， 他們進入檢測器進行檢測，從而實現對樣品的分析。

用途：色譜柱的包裝材料和流動相的組成應在各品種下指定。 常用的色譜柱填料是矽膠和化學鍵合二氧化矽。

後者是十八烷基矽膠鍵合矽膠，其次是辛基鍵合矽膠，也使用氰基或氨基鍵合矽膠; 離子交換樹脂用於離子交換色譜; 凝膠或玻璃微球等，用於分子排阻色譜等。 樣本量通常為幾微公升。 除另有說明外，柱溫為室溫，檢測器為紫外吸收檢測器。

使用紫外吸收檢測器時，所使用的流量相應地滿足紫外分光光度法的溶劑要求。

除固定相型別、流動相組成、檢測器型別外，文中各項規定的其餘條件包括色譜柱的內徑、長度、固定相的等級、載體的粒度、流動相的流速、混合流動相各組分的比例、 柱溫和固定相反應的化學鍵合。

樣品量、檢測器的靈敏度等都可以適當改變。

以適應特定品種，滿足系統適用性試驗的要求。 典型的色譜圖記錄時間約為 20 分鐘。 2.系統適用性測試。

儀器的適用性試驗應根據各品種的要求進行，即儀器應採用規定的參考物質進行試驗和調整，並應符合規定的要求; 或指定分析狀態下色譜柱的最小理論板數、分離度和拖尾因子。

如何使用高效液相色譜（HPLC）。

色譜法是一種分離技術，其中樣品的混合物通過樣品成分在稱為色譜分離柱的色譜柱中的兩相之間連續分布來分離。

其中乙個相是固定的，稱為固定相;

另一相是流體（氣體或液體），它攜帶樣品混合物通過該固定相，稱為流動相。

當流動相中攜帶的混合流通過固定相時，它與固定相相互作用。 由於混合物中各組分的性質和結構不同，以及固定相之間產生的力的大小和強度的差異，隨著流動相的運動，混合物在兩相之間反覆分布和平衡，使組分被固定相保留不同時間， 使它們以一定的順序流出固定相。結合適當的柱後檢測方法，可以實現混合物中組分的分離和檢測。

按兩相狀態分類。

以氣體為流動相的色譜稱為氣相色譜（GC）g-s和g-l