5個回答
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很容易被照片漂白。
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綠色螢光蛋白,簡稱GFP,於1962年由Shimomura等人首次在學名Aequorea Victoria的水母中發現。 它們的基因產生的蛋白質在被藍色波長範圍內的光激發時會發出綠色螢光。 這種發光過程還需要冷光蛋白AEQUORIN的幫助,這種冷光蛋白可以與鈣離子(Ca+2)相互作用。
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GFP螢光極其穩定,在激發光下,GFP的抗光漂白能力強於螢光素,特別是在450 490nm藍光波長處。 GFP在氧化態下需要發出螢光,強還原劑可以使GFP變成非螢光形式,但一旦重新暴露在空氣或氧氣中,GFP就會發出螢光。
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GFP螢光極其穩定,在激發光照射下,GFP比螢光素具有更強的抗光漂白性,特別是在450 490nm藍色波長處。
GFP 需要在氧化狀態下發出螢光,強還原劑將 GFP 轉化為非螢光形式,但一旦重新暴露在空氣或氧氣中,GFP 螢光會立即恢復。 一些弱還原劑不影響GFP螢光。 中度氧化劑對GFP螢光的影響也很小,如生物材料的固定,脫水劑戊二酸或甲醛。
GFP-融合蛋白的螢光靈敏度遠高於螢光素標記的螢光抗體,抗光漂白性更強,因此更適合定量測定和分析。 然而,由於GFP不是一種酶,螢光訊號沒有被酶放大,因此GFP的敏感性可能不如某些酶報告蛋白。
由於GFP螢光是生物細胞的自主功能,螢光的產生不需要任何外源反應底物,因此GFP作為一種廣泛使用的活報告蛋白,具有任何其他酶報告蛋白無法比擬的作用。
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質粒可以被複製和轉染,使其在細胞內表達,並且可以在汞燈的激發光下發出綠色螢光。 一般用作實驗中的參考。 下面是乙個簡單的示例:
干擾細胞系的構建是可以看到綠色螢光蛋白的表達干擾了細胞系的構建過程。 此外,通過免疫學技術顯示蛋白質表達,通常是半定量的。
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