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吸附色譜固定相是由吸附劑表面各組分的吸附容量差異分隔而成的固體吸附劑。
分配色譜固定相是液態的,物質通過兩種液相中各組分的分配係數或溶解度的差異來分離。
離子交換色譜固定相是一種離子交換劑,它通過各組分對離子交換劑的不同親和力進行分離。
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總結。 它們在原理上都是一樣的,但區別在於流動相和色譜劑之間的力。
凝膠過濾,也稱為沸石色譜法,使用微孔凝膠分離不同分子量的組分。
離子交換是利用分離物質的電荷與色譜劑上的離子基團之間的靜電相互作用。
比較凝膠過濾色譜法和離子交換色譜法之間的差異。
在原來的面板上,它們都是一樣的,區別在於流動相和色譜劑之間的力差。 凝膠過濾,也稱為沸石色譜法,使用微孔凝膠分離不同分子量的組分。 離子交換是利用分離物質的電荷與離子基團在層析敏化劑上的靜電相互作用。
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離子交換色譜法。
ionexchange
色譜法,簡稱IEC,是根據酸度、鹼度、極性以及物質攜帶的陰離子和陽離子的差異的原理,從複雜混合物中分離具有相似性質的大分子的方法之一。 不同電荷的物質對色譜柱上的離子交換劑有不同的親和力,可以依次將沖洗溶液的離子強度和pH值從色譜柱中分離出來。
離子交換色譜大致分為 5 個步驟:
1.離子擴散到樹脂表面。
2.離子通過樹脂擴散到交換位點。
3.交換位點的離子交換; 分子交換的電荷越多,它與樹脂的結合越緊密,被其他離子取代的可能性就越小。
4.交換的離子擴散到樹脂表面。
5.沖洗液通過,交換的離子擴散到外部溶液中。
離子交換樹脂的交換反應是可逆的,遵循化學平衡規律,當定量混合物通過塔時,離子不斷交換,濃度逐漸降低,幾乎全部可以吸附在樹脂上; 在漂洗過程中,不斷加入新的交換液,使其向正反應方向移動,從而可以洗掉樹脂上的離子。
如果被純化的物質是氨基酸分子,那麼分子上的淨電荷取決於氨基酸的等電點和溶液的pH值,所以當溶液的pH值
該值較低,氨基酸分子帶正電,會與強酸性陽離子交換樹脂結合;隨著緩衝液的pH值通過,氨基酸會逐漸失去正電荷,削弱其結合力,最後被洗掉。 由於不同氨基酸的等電點不同,這些氨基酸會依次被洗掉,最先被洗掉的是酸性氨基酸,如二分氨基酸
酸和谷氨酸
酸(pH3 4左右),其次是甘氨酸和丙氨酸等中性氨基酸。 鹼性氨基酸(如精氨酸和賴氨酸)在高pH值的緩衝液中仍然帶正電荷,因此它們僅在pH值10 11左右出現。
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離子交換層析原理:是以離子交換劑為固定相,根據流動相中組分分離劑的結合力與可逆交換過程中交換器上的平衡離子的結合力之差,對離子發生器進行分離的層析方法。
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它是一種以離子交換劑為固定相,根據流動相中基團分離劑的結合力與可逆交換時交換劑上的平衡離子的差異來分離隔膜的方法。
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離子交換色譜的原理如下:
離子交換色譜(IEC)是純化生物大分子應用最廣泛的方法之一。
離子交換色譜法是在一定pH條件下,根據蛋白質的不同電荷分離蛋白質的方法。 通常用於蛋白質分離的離子交換劑是弱酸性羧甲基纖維。
離子交換色譜法是一種在一定pH條件下,根據蛋白質的不同電荷分離蛋白質的方法。 通常用於蛋白質分離的離子交換劑是弱酸性羧甲基纖維。
應用:離子交換色譜法已廣泛應用於各個學科。 主要用於生化和臨床生化測試中分離氨基酸、肽和蛋白質,也可用於分離核酸、核苷酸等帶電生物分子。
擴充套件內容:混合離子交換柱(混床):混合床按一定比例填充正極和陰離子樹脂(一般為1:
2、使陽陰樹脂同時到達交換終點並同時再生)裝入混合塔中,實際上在水中結合成H+和OH-,立即生成電離度小的水分子(H2O),在陽床或陰床交換時幾乎不會產生反向交換現象, 所以交換反應可以進行得非常徹底,所以混床的出水水質要比陽陰床串聯的雙床所能達到的水質要好,可以制得純度相當高的成品水。
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離子交換色譜法是一種基於蛋白質電荷差異的分離純化方法。 蛋白質的可充電性由蛋白質多肽中的帶電氨基酸決定。 由於蛋白質中氨基酸的電性質取決於培養基的pH值,因此蛋白質的電荷性也取決於培養基的pH值。
當pH值低時,負基團被中和,而正基團多; 在較高的pH值下,蛋白質的電特性與低pH值下的電學性質相反。 當蛋白質的pH值使蛋白質的正負電荷相等時,此時的pH值稱為等電點。 離子交換色譜中使用的交換劑是通過酯化、氧化等化學反應引入正離子或負離子基團而製成的,可與帶相反電荷的蛋白質交換和吸附。
具有陽離子基團的交換劑可以置換和吸附帶負電荷的物質,稱為陰離子交換劑,如DEAE-纖維素樹脂; 否則,它被稱為陽離子交換劑,如CM-纖維素樹脂。 不同的蛋白質具有不同的等電點,在一定條件下解離所攜帶的電荷的種類和量也不同,因此可以與具有不同親和力的不同離子交換劑進行交換和吸附。 當緩衝液中的離子基團與與離子交換劑結合的蛋白質競爭時,親和力低的蛋白質分子首先被解吸和洗脫,而親和力高的蛋白質隨後被解吸和洗脫。
因此,通過增加緩衝液的離子強度或改變pH值,可以改變蛋白質的吸附,從而分離出具有不同親和力的蛋白質。
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離子交換色譜法是以離子交換劑(具有離子交換性質的物質)為固定相,利用其與流動相中離子能量的可逆交換特性來分離離子化合物的層析方法。 即溶液中離子與離子交換劑中官能團交換的反應過程。 電荷小、親和力小的先洗脫,功率大、親和力大的洗脫。
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1.薄層色譜法又稱薄層色譜法,是以包被在支撐板上的載體為固定相,以合適的溶劑為流動相,對混合樣品進行分離、鑑定和定量的層析分離技術,是快速分離脂肪酸的一種特別有效的色譜方法, 類固醇、氨基酸、核苷酸、生物鹼等物質。
2.基本原理:吸附薄層層析分離法,它利用不同組分對同一吸附劑的不同吸附能力,使流動相在流動過程中流過固定相,連續吸附、解吸、再吸附、再吸附、再吸附,從而達到分離各組分的目的。
3.薄層色譜可分為薄層吸附色譜、薄層分割色譜、薄層離子交換色譜、薄層凝膠色譜等,根據載體的不同作為固定相。
4.物質分子之所以能停留在固體表面,是因為固體表面的分子與固體內部的分子的吸引力不相等,吸附過程是可逆的,吸附物在一定條件下可以解吸出來,吸附層析過程是乙個不斷產生平衡和不平衡的動態平衡過程, 吸附和解吸。