如何確定細菌螢光標記的同源重組位點

1.在所謂的位點特異性重組中，DNA片段的相對位置發生偏移，導致DNA序列的不同重排。 位點特異性重組不依賴於 DNA 序列的同源性（儘管它也可以具有非常短的同源性序列），而是取決於與某些酶結合的 DNA 序列的存在。 這些特異性酶催化DNA鏈斷裂和重新連線，並啟動位點特異性重組。

在同源重組中，DNA鏈的切斷是完全隨機的，揭示了與Reca等蛋白質結合的序列，導致交叉重組。 2.典型的位點特異性重組系統具有以下三個要素：一組特定的識別位點，簡單的識別序列，或負責識別不同蛋白質因子的複雜結構; 識別DNA序列、介導切割重聯並實現鏈交換的重組酶（SSRSs）在某些系統中要麼是單一因子，要麼是與不同蛋白質因子協同作用以達到不同的重組結果。 位點特異性重組不需要DNA合成，也不需要能量增益或損失，並且需要專門研究DNA斷裂和重聯的特殊機制來維持磷酸二酯鍵平衡。

根據重組位點的順序和方向性，位點特異性重組有三種可能的結果，即整合、切除和倒置

明確告訴你這是乙個同源重組。

同源重組：DNA分子之間或內部的重組。

將細菌與螢光蛋白一起培養一段時間，然後可以在細菌內部看到螢光蛋白！

這種交換是可逆的，預先存在的DNA序列被保留而不會丟失; 噬菌體和細菌DNA之間有乙個非常短的同源序列，重組交換必須通過乙個特定的核苷酸。 這兩個特徵是位點特異性重組的共同點。

很好的專業問題，我閱讀了一些資訊。 將30只SD大鼠隨機分為空白對照組、對照組和甲氨蝶呤（MTX）組3組，每組10只。

對照組和MTX組大鼠給予GFP標記的大腸桿菌TG1追蹤移位細菌，MTX組大鼠皮下注射MTX製成大鼠化療模型。 採用螢光顯微鏡和質粒消化電泳鑑定從內臟中分離出的細菌是否在腸道內。 結果：

從MTX大鼠腸繫膜淋巴結、肝臟、脾臟和腎臟中分離GFP標誌物。 結論：MTX可誘導細菌易位，GFP示蹤技術是細菌易位動物研究中一種簡單、可靠、有效的方法。

綠色螢光蛋白，簡稱GFP，由Osamu Shimomura等人於1962年在一種學名Aequorea Victoria的水母中首次發現。 它們的基因產生的蛋白質在被藍色波長範圍內的光激發時會發出綠色螢光。 這種發光過程還需要冷光蛋白aequorin的幫助，這種冷光蛋白可以與鈣離子（Ca2+）相互作用。

在aequorea victoria中發現的野生型綠色螢光蛋白分別為395 nm和475 nm，是最大和第二大激發波長，其發射波長峰值為509 nm，在可見綠色範圍內較弱。 從海三色堇中得到的綠色螢光素僅在498 nm處具有高激發峰。

在細胞生物學和分子生物學領域，綠色螢光素基因常被用作報告基因。 一些修飾形式可以用作生物探針，綠色螢光素基因也可以轉殖到脊椎動物（例如兔子）中，並用於複製假設的實驗方法。

具體操作流程。

1.我不知道你測試了多少抗生素，你可以再嘗試一些。 我經常使用的抗生素有很多種，ampr、kanr、cmr、puro、hyg、bsd、specr、zeor，你可以全部嘗試。

2.另外，我有乙個想法，只是乙個想法，你可以參考一下。 由於正濾波不起作用，您可以嘗試負濾波，並且有許多負濾波系統可供選擇。

您可以取陰性篩選標記進行重組，將細菌溶液按梯度稀釋並塗在非耐藥板上，找到菌落數量合適的濃度，使用印跡或直接挑選轉殖，將這些轉殖轉移到陰性篩選板上，做好標記，並挑選出那些不能在陰性篩選板上生長的轉殖進行鑑定。