為什麼HPLC的速度越來越快，為什麼HPLC峰的峰值時間越來越早，越來越集中？

你能再給我們一點提示嗎？

高峰時間是早的，無論是反映在中午，還是一段時間，一段時間。

最有可能發生的情況是，高極性流動相的幫浦有點堵塞，導致洗脫越來越強，這就是一天中的溫差，系統沒有很好地平衡。

有幾個因素會影響峰的時間：流動相比、流動相緩衝液的pH值、流速、色譜柱溫度和色譜柱的粒徑。

在您的情況下：（1）儀器的前幾針沒有很好地平衡。 （2）立柱內部損壞坍塌 （3）看儀錶盤壓力是否穩定，管路是否堵塞？ 如果樣品溶液太髒，也容易堵塞流水線。

由於分離效率高，分離效率不僅是理論板的數量，還有分離樣品的時間長短，因為它比普通液相色譜、離子色譜、氣相色譜等的理論板數要高，而且分離速度快，所以被稱為高效液相， 而超高效能液相是分離效率高於高效液相，這主要是由柱填料粒徑較小，分離系統壓力較高決定的。

HPLC是High Performance Liquid Chromatography，英文全稱是High Performance Liquid Chromatography。 該方法在化學、醫藥、工業、農藝、商檢、法醫檢驗等領域被用作重要的分離分析技術。

用途：高效液相色譜法更適合於沸點高、熱穩定性差、生理活性較大、相對分子量較大的物質的分離分析，因此廣泛用於核酸、肽、內酯、熔融環芳烴、聚合物、藥物、人體代謝物、表面活性劑、抗氧化劑、農藥、除草劑等物質的分析。

原理：高效液相色譜法以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將不同極性的單一溶劑或混合溶劑、緩衝液等不同極性的流動相幫浦入裝有固定相的色譜柱中，柱內組分分離後進入檢測器進行檢測， 從而實現樣品的分析分離。

操作方法：如下圖所示，溶劑容器中的流動相被幫浦吸入，混合後由梯度控制器按一定梯度輸出，測量壓力和流量，在保護柱和分離柱測試後將進樣閥（裝置）引入檢測器， 資料由資料處理裝置處理或色譜圖由記錄儀記錄，餾分收集器收集餾分，廢液瓶收集廢液。

高效液相色譜（HPLC）又稱“高效液相色譜”、“高效液相色譜”、“高分辨液相色譜”、“現代柱層析”等。

高效液相色譜是色譜的乙個重要分支，以液體為流動相，採用高壓輸注系統，將不同極性或不同比例的單一溶劑、緩衝液等流動相幫浦入裝有固定相的色譜柱中，分離柱內各組分後， 他們進入檢測器進行檢測，從而實現對樣品的分析。

原理及操作方法：

儲液槽中的流動相通過高壓幫浦幫浦入系統，樣品溶液通過進樣器進入流動相，並由流動相載入到色譜柱（固定相）中。

1.概念：

HPLC是指高效液相色譜，英文全稱是High Performance Liquid Chromatography。 又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分辨液相色譜”、“現代柱相色譜”等。

高效液相色譜是色譜的乙個重要分支，以液體為流動相，採用高壓輸注系統，將不同極性或不同比例的單一溶劑、緩衝液等流動相幫浦入裝有固定相的色譜柱中，分離柱內各組分後， 他們進入檢測器進行檢測，從而實現對樣品的分析。

該方法已成為分離分析技術在化學、醫藥、工業、農藝、商檢、法醫檢驗等領域的重要應用。

2、原理：液相色譜按分離機理不同可分為：液固吸附色譜、液液分配色譜、離子交換色譜、離子對色譜、分子排阻色譜或凝膠滲透色譜。

3.HPLC的應用。

在環保方面，HPLC可應用於：

1）農藥殘留分析：含氯農藥、有機磷農藥、除蟲菊等;

2）致癌物：硝基呋喃及其代謝產物、黴素、亞硝胺、苯並芘等;

3）水質分析：內分泌汙染物等;

在生物化學中，HPLC可應用於：

1）蛋白質分析;

2）肽分析;

3）核酸;4）氨基酸;

高效液相色譜（HPLC）是上世紀七十年代發展迅速的一種高效、快速的分析分離技術，是現代分離測試的重要手段。

色譜法的分離原理是，當溶解在流動相中的各組分通過固定相時，由於與固定相相互作用（吸附、分布、排斥、親和）的大小和強度不同，在固定相中的停留時間不同，然後依次流出固定相。 它也被稱為色譜法和色譜法。

操作方法： 1、過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。

2.對過濾後的流動相進行超聲波脫氣10-20分鐘。

3、開啟HPLC工作站（含電腦軟體和色譜儀），連線流動相管路，連線檢測系統。

4.進入HPLC控制介面主選單，點選手動進入手動選單。

5、若一段時間未使用，或流動相已更換新相，需先沖洗幫浦和注射閥。

6.調節流量，第一次使用新的流動相時，可以先試一下壓力，流量越大，壓力越大，一般不超過2000。

7.設計變形方法。

8.注射和注射後操作。

9、關機時，先關掉電腦，再關掉液相色譜。

10、填寫登記簿，並由負責人簽字。

11.應採用流動相色譜純度，水應為20m去離子水。

12.柱子很脆弱，第一種方法是不要讓液體通過柱子。

13.所有通過塔的液體都需要嚴格過濾。

14.壓力不宜過大，最好不要超過2000 psi。

我認為首先，您應該檢視保留時間。 增加峰面積的前提是保證保留時間不來回移動。 否則，重點應放在流動相上。

如果排除保留時間，則有幾種可能性。

1.樣品埠處的殘留物。 我不知道您的儀器是手動填充還是自動填充。

您可以先用一根針頭清洗入口，然後用一根空白針頭清洗入口。 在主峰的保留時間內尋找空白針的任何殘留物。 可能是前一根針的樣品沒有被清洗，留給下一根針。

2.溶劑揮發。 當溶劑是純甲醇或純乙腈時，這種情況更為常見。 但應該改變什麼並不是特別明顯。 您可以嘗試冷凍儲存，例如樣品冷凍機，或者乾脆將其放入冰箱並在時間成熟時注射。

3.樣品降解。 如果你所謂的樣本是乙個主成分，那麼這可能就不存在了。

如果雜質峰越來越大，那是可能的。 最大的主成分降解，然後降解成這些小雜質峰。 結果，這些雜質峰越來越大。

您可以分析樣品主成分的結構，看看它是否穩定。 如果真的是這個原因，那就沒辦法了，或者你應該考慮改變溶劑和低溫儲存。 否則，樣品只能暫時使用。

1.檢視以下方法中的精度是否波動，並檢查您的峰面積增加是否在範圍內;

2、檢查穩定性，注射過程中溶劑揮發是否導致樣品濃度公升高;

3、如果是全自動液相，看是否加了洗針程式;

4.進入一根針後，輸入一根空白針，看看有多少殘留物，如果殘留物較大，建議在兩根針之間加乙個空白。

假設我們要檢測一種親水性物質，如果流動相中含有高比例的水，那麼它就不容易被色譜柱吸附，所以分離效果不好。 在這種情況下，有必要考慮減少水的比例。 對於pH值，我用它來驗證流動相配方的配比，例如，標準品是9，如果是11，則流動相可能有問題。

《色譜世界》的學習培訓欄目有詳細的色譜理論知識體系，可以檢視。

您指的是流向移動相脫氣的流量，還是源儀表排氣？

兩者的主要目的是相同的，都是為了防止氣泡進入儀器。 如果氣泡進入幫浦，它可能會堵塞，儀器會出現故障。 色譜柱也可能被堵塞並導致報廢。 氣泡進入檢測器，影響檢測。

流動相脫氣是去除溶解在流動相液體中的氣體。 儀器的吹掃排氣是將氣體從溶劑過濾器頭排到幫浦的前線。

用於HPLC的流動相BAI必須經過預處理

氣，否則容易在志

從系統中逃逸的氣泡，DAO

影響幫浦的執行。 氣泡也會被遮蔽。

板柱的分離效率影響檢測器的靈敏度、基線的穩定性，甚至使其無法檢測。 （噪音增加、基線不穩定、突然跳躍）。 此外，溶解在流動相中的氧氣可以與樣品、流動相甚至固定相（例如烷基胺）發生反應。

溶解氣體還會導致溶劑pH值發生變化，從而導致分離或分析結果出現錯誤。

常用的脫氣方法有：加熱煮沸、抽真空、超聲波、吹氦等。

儀器使用一段時間後，部件會老化，儀器的效能指標肯定會比剛安裝時差。