為什麼PCR用不完，都散了

擴散的原因有很多：

1.擴增結束後PCR產物是否立即進行電泳，電泳液是否新鮮，是否很可能導致擴增產物降解。

2.PCR系統沒有被探索過，用正交實驗找出正確的PCR系統，不要簡單地根據別人的檢測資料去做，不要太相信文章中的資料，每個人都會保護自己的檢測結果和資料。

3.如果擴增所用引物的設計不好，找別人幫你看，或者找生物公司幫你設計。 如果它是通用引物，請確保您要擴增的基本成分高度保守。

4.模板的問題，你使用的模板是否降級。 是 DNA 是模板，還是 RNA 是模板。

最後，如果從多個擴增帶開始，可能是引物不特異性或退火溫度太低。 如果在探索條件後仍有完全瀰漫現象，建議更換引物。

從頭拖到尾，另一對引物。

可以做到。

表明引物之間沒有形成二聚體。

相反，第一對引物的設計是有問題的（特異性。

很差）。如果必須擴增該區域，建議將引物放在兩側。 如果您沒有好的設計軟體，建議您嘗試 primer3（目前最好的免費引物設計）。

如果仍然不起作用，請將序列傳送給我，我會為您設計（我有專業軟體，ABI Primer Express 3 和 Invitrogen Vector NTI 10）。

它通常是由過度的非特異性擴增引起的，非特異性擴增公升高退火溫度試試吧。

如果PCR產物放置時間過長，應考慮產物降解; 如果在PCR後及時上樣樣品，請考慮引物特 異性不良或不純的模板（包括其他DNA序列的降解和摻假）。

如果將PCR產物用作模板，則用量過大。

膠水煮不好，也會一樣。

Stripe 是一種將連續資料拆分為相同大小的塊，並將每條資料寫入陣列中不同磁碟的方法。 簡而言之，條帶化是一種將多個磁碟驅動器合併為乙個卷的方法。 在許多情況下，這是通過硬體控制器完成的。

當多個程序同時訪問乙個磁碟時，可能會發生磁碟衝突。 大多數磁碟系統對訪問次數（每秒 IO 運算元，IOPS）和資料傳輸速率（每秒傳輸的資料量，tps）都有限制。 當達到這些限制時，需要訪問磁碟的程序將不得不等待。

這稱為磁碟衝突。 避免磁碟衝突是優化IO效能的重要環節，優化IO效能與優化其他資源（如CPU、記憶體等）有很大不同，優化IO最有效的方法就是最大限度的均衡。

條帶化是 iO 自動負載平衡的一種形式。

條帶化是一種將一段連續資料劃分為許多小部分並將它們儲存在不同磁碟上的技術。 這允許多個程序同時訪問資料的多個不同部分，而不會導致磁碟衝突。

當您需要按順序訪問這些資料時，您可以獲得最大的 IO 並行度，從而產生非常好的效能。 由於條帶化在IO效能方面具有優越的效能，因此條帶化技術涉及應用系統所在的計算環境中的多個層或平台，例如作業系統和儲存系統。

首先，懷疑，特異性不好，解決方法：

1、可能是模板用量過高，模板濃度降低10-1000倍;

2、適當提高退火溫度1-3度，或使用比你之前的退火溫度高1-3度的5個迴圈，再使用前乙個溫度p的剩餘迴圈（即在程式中多設定2個步驟）;

3.稍微降低mg離子的濃度，如果之前新增過，試試;

如果上述方法不能解決問題，請檢查模板、引物和 Taq，重新取出模板，重新稀釋引物，然後使用新的 PCR 試劑。

若有任何問題，請繼續討論，純手工製作，歡迎採用，祝實驗順利進行！

Taq酶的問題最有可能，也有可能是引物因與RNase接觸而被降解。

最好更改要新增到PCR系統中的所有內容，如果之前做得很好，模板應該沒問題。

我也用cDNA作為模板，沒有擴散條帶，但經常出現非特異性條帶。 擴散帶的原因可能是電泳溶液被汙染了，或者你正在做的凝膠有問題，也可能是你的cDNA被部分降解了，降解的原因主要是由於時間和溫度。 放大後，應立即進行電泳，其次，電泳的室溫不宜過高，時間也不宜過長，一般最多半小時左右。

此外，在擴增過程中，由於氣候原因，一些PCR儀器在室溫超過30度後無法正常工作，這取決於PCR儀器的型號，其次是前期RNA提取效果不佳，或者由於提取的RNA降解而影響了cDNA模板的質量。

最後，關於PCR部分，PCR的體系和退火溫度非常重要，尤其是鎂離子的濃度，最好採用正交試驗找出最佳體系，然後利用溫度梯度找到最合適的退火溫度。 因為設計的質量也是一大問題，呵呵！ 讓我們先試試吧！

這有幾個原因。

1.PCR本身的問題不在於它是一台PCR機。 也許是底漆設計不好，也可能是回程溫度不是最合適的。

2.DNA太厚。 通常，對於 25 微公升系統，DNA 總量不應超過 100 ng。

3.凝膠未準備好。 一般來說，它是即用型的，不應放在外面超過2小時。

第乙個是最有可能的。

如果有條帶色散，可能是模板用量大，或者條件不合適，比如溫度、時間、迴圈數什麼的; 如果沒有條帶擴散，通常是PCR反應不成功。

丁香園和小木蟲在這個領域有很多帖子和專家。