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分離蛋白質混合物的各種方法主要基於溶液中蛋白質的以下特性:1)分子大小;2)溶解性;3)電荷;4)吸附效能;5)其他分子的生物親和力的分離。分離和純化蛋白質的常用方法有:
1、鹽析和有機溶劑沉澱:在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽,破壞蛋白質的膠體性質,使蛋白質從溶液中析出,稱為鹽析。 常用的預中性鹽有:
硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等 鹽析時,溶液的pH值在蛋白質的等電點處效果最佳。 任何能與水按任意比例混合的有機溶劑,如乙醇、甲醇、丙酮等,都會引起蛋白質沉澱。
2.電泳:蛋白質分子在其PI上方或下方的溶液中具有淨負電荷或正電荷,因此它們可以在電場中移動。 電泳遷移率的大小主要取決於蛋白質分子攜帶的電荷量和分子的大小。
3.透析法:透析袋膜的超濾效能可用於從小分子中分離大分子物質。 4.色譜:
通過利用混合物中每種組分的物理和化學性質的差異以及相互接觸的兩相(固定相和流動相)之間的分布來進行分離。 主要有離子交換色譜法、凝膠色譜法、吸附色譜法和親和色譜法,其中凝膠色譜法可用於測定蛋白質的分子量。 5.分子篩:
又稱凝膠過濾法,將蛋白質溶液加入到塔頂,讓它向下洩漏,小分子蛋白質進入孔內,因此在塔中停留時間較長,大分子蛋白質不能入孔流出,因此可以分離出不同大小的蛋白質。 6.超速離心:利用不同密度的物質,超速離心後,將它們分布在不同的液層中並分離。
超速離心也可用於確定蛋白質的分子量,該分子量與其沉降係數 s 成正比。
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1.等電點沉澱法。
等電點沉澱法是利用蛋白質在等電點的溶解度最低,結合各種蛋白質具有不同等電點的特性進行分離的方法。
在等電點,蛋白質分子以兩性離子的形式存在,其分子淨電荷為零(即正負電荷相等),此時,溶液中的蛋白質分子粒子不具有相同的電荷相互排斥,分子之間的力減弱, 而且顆粒非常容易碰撞和縮合而產生沉澱,因此蛋白質在等電點的溶解度最小,最容易形成沉澱。
等電點的許多物理性質,如粘度、膨脹、滲透壓等,都降低了,這有利於懸浮液的過濾。
2.鹽漬。 鹽析是指在蛋白質的水溶液中加入中性鹽,隨著鹽濃度的增加而使蛋白質沉澱的現象。 中性鹽是一種強電解質,溶解度大,在蛋白質溶液中,一方面與蛋白質爭奪水分子,破壞蛋白質膠體顆粒表面的水膜; 另一方面,蛋白質顆粒上的大量電荷被中和,使水中的蛋白質顆粒積聚並沉澱。
在一些蛋白質溶液中加入一些無機鹽溶液後,可以降低蛋白質的溶解度,使蛋白質從溶液中凝固沉澱出來,這叫做鹽析,這是一種物理變化,可以恢復。 在一些蛋白質溶液中加入某些重金屬鹽可以改變蛋白質的性質並縮合,然後從溶液中沉澱出來,這種作用稱為變性,性質改變,是一種化學反應,是無法恢復的。
將動物脂肪或植物油與氫氧化鈉在皂化鍋中按一定比例攪拌加熱,反應後形成的高階脂肪酸鈉、甘油、水形成混合物(膠體)。 鍋中加入鹽顆粒,攪拌靜置,使高階脂肪酸的鈉與甘油和水分離,漂浮在液體表面。
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蛋白質沉澱是溶液中溶質從液相沉澱到固相的過程。 蛋白質從溶液中沉澱的現象稱為蛋白質沉澱。
常用的蛋白質沉澱方法有鹽析法、等電點沉澱法、有機溶劑沉澱法、生物鹼試劑法和某些酸(如三氯乙酸)沉澱法等。
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布拉德福德法測定蛋白質含量的原理是,考馬斯亮藍G250可以通過與蛋白質結合,用分光光度計在595nm處的吸光度讀數,將標準蛋白與G250結合建立標準曲線,然後將讀數代入標準曲線,以確定待測蛋白質與G250結合顯色後的蛋白質含量。
缺點主要是特殊蛋白質的結構、緩衝液成分中的干擾試劑等。
利脲和亞葉酚試劑方法的明顯缺點和許多侷限性促使科學家尋找更好的雞蛋。 取6支試管分別標記,前5支試管加入不同濃度的標準蛋白溶液,最後一支試管加入待供測蛋白質溶液,不加入標準蛋白溶液,加入蒸餾水使每支試管內液體總量一致。
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採用布拉德福德法(Coomassie Brilliant Blue)測定蛋白質含量。 其原理是考馬斯亮藍在電離態下呈棕紅色,最大吸光度為488nm。 當與蛋白質結合時,它會變成藍色,當與色素結合時,蛋白質在波長 595 nm 處吸收的光最多。
其吸光度值與蛋白質含量成正比,可用於蛋白質的定量測定。
蛋清和考馬斯亮藍色在2min左右達到平衡,反應非常迅速。 粘結劑在室溫下穩定1h。 該方法製備的試劑簡單,操作方便,反應靈敏度高。
靈敏度是Lowry方法的4倍,可以測定微克級的蛋白質含量。 主要缺點是緩衝液中特定蛋白質和干擾劑的結構。
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蛋白質由氨基酸組成,是另乙個重要的能量貢獻者,每克蛋白質提供 4 卡路里的熱量。 但蛋白質更重要的作用是生長和新陳代謝。 過量攝入蛋白質會增加腎臟的負擔。
因此,蛋白質攝入應根據營養狀況、生長發育要求在供需之間平衡。 一般來說,蛋白質攝入量約佔總熱量的20%。
蛋白質的生理作用:
生長發育、新陳代謝是主要作用。
它還提供每克 4000 卡路里的卡路里。
增加腎臟的負擔。
蛋白質型別:
動物蛋白:它是人體的主要蛋白質,如肉類、家禽和蛋類等,這些食物提供蛋白質的同時,也會讓我們吃飽和脂肪和膽固醇等對身體不利的成分。 因此,瘦肉、魚肉、去皮雞肉和蛋清是最佳選擇,被稱為“優質蛋白質”。
植物蛋白:是另一種**蛋白,主要存在於豆類中,植物蛋白飽和脂肪和膽固醇含量低,且含有大量膳食纖維,價格低廉,適合糖尿病患者食用。
蛋白質是所有生命的物質基礎,不僅因為蛋白質是人體組織器官的基本成分,更重要的是蛋白質本身是不斷合成和分解的。 這種合成和分解的過程促進了生命活動,調節了機體的正常生理功能,保證了機體受損組織的生長、發育、繁殖、遺傳和修復。 根據現代生物學觀點,蛋白質和核酸是生命的主要物質基礎。
蛋白質的生理功能:蛋白質是組織和細胞的重要組成部分,如肌肉、骨骼和內臟器官。 所有細胞的原生質都以蛋白質為主,動物的細胞膜和間質也主要由蛋白質組成。
它用於更新和修復組織細胞。 參與物質代謝和生理功能的調節。 氧化獲取能量。
1克蛋白質在體內氧化,產生約焦耳的能量。 其他功能。 如多功能血漿蛋白的生理功能。
構成蛋白質的氨基酸有20多種,只有一部分能在體內合成,其餘的必須由食物蛋白質提供。 體內不能合成或合成太慢的氨基酸必須由食物蛋白提供,因此也被稱為“必需氨基酸”。 人體可以合成的氨基酸,不一定非要由食物蛋白提供,食物蛋白也被稱為“非必需氨基酸”。
在體內用於合成蛋白質的眾多氨基酸中,有8種必需氨基酸需要餵養,分別是賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸。 食物所含的必需氨基酸越多,其營養價值就越高。 肉類、蛋類、牛奶等動物蛋白均含有8種必需氨基酸,又稱優質蛋白質; 植物蛋白(如豆類蛋白質)中所含的必需氨基酸是不完整的。
但是,如果麵食由玉公尺、小公尺和大豆蛋白混合物組成,其營養價值會顯著提高。 這種將幾種營養價值低的蛋白質混合在一起,以提高其營養價值的效果,也稱為不同蛋白質的互補作用。
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牛胰蛋白酶允許細胞分散成單個細胞。
人胰島素是體內唯一能降低血糖的激素,也是唯一能同時促進糖原、脂肪和蛋白質合成的激素。
免疫球蛋白作用。
1)抗體介導的細胞毒性。
1)抗體介導的細胞毒性。(3)抗體中和。 (4)與抗原形成免疫複合物後的破壞作用。 (5)宿主細胞或組織致敏,導致補體活化。
人體血紅蛋白能通過動脈血將氧氣從肺部輸送到組織,又能將組織代謝產生的二氧化碳通過靜脈血輸送到肺部,然後排出體外。 眾所周知,這種功能與其亞基結構的兩種狀態有關,在缺氧處(如在靜脈血中),亞基處於夾緊狀態,使氧氣不能與血紅素結合,因此可以快速去除需氧組織中的氧氣; 在富氧肺中,亞基結構鬆弛,使氧氣容易與血紅素結合,從而迅速將氧氣帶走。 亞基結構的轉換使呼吸功能能夠有效地進行。
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(1)組成組織和維修組織。 蛋白質是構成組織細胞的主要材料。 人的大腦、神經、肌肉、內臟、血液,甚至指甲和頭髮都是由蛋白質構成的。
蛋白質是機體發育生長的主要成分,是衰老組織生長後更新的主要成分,是損傷後組織的再生修復。
2)構成酶和某些激素的成分。
3)增強機體免疫力,構成抗體。人體免疫力的強弱取決於抗病抗體的量。
4)調節滲透壓。在正常人中,血漿和組織液之間不斷交換水,但保持平衡。 它的平衡取決於電解質的總量和血漿中膠體蛋白的濃度。
當組織液和血漿的電解質濃度相等時,兩者之間水的分布取決於血漿中白蛋白的濃度。 如果飲食中長期缺乏蛋白質,血漿蛋清含量降低,血液中的水分過多地滲透到周圍組織中,導致營養不良性水腫。
5)熱能供應。雖然蛋白質在體內的主要功能不是提供熱能,但老細胞或受損組織細胞中的蛋白質不斷被分解以釋放能量。 此外,如果每天從食物中攝入的蛋白質不能滿足人體的需要,或者用量過多,也會被氧化分解釋放能量。
因此,蛋白質也可以提供一些熱量。 由此可見,蛋白質在生命活動過程中無處不在,具有多種生理功能,是人體必需的重要營養素之一。
蛋白質含量高的食物包括:牲畜奶,如牛奶、羊奶、馬奶等; 牲畜肉,如牛、羊、豬、狗等; 禽肉,如雞、鴨、鵝、鵪鶉、鴕鳥等; 雞蛋,如雞蛋、鴨蛋、鵪鶉蛋、魚蝦、蟹等; 還有大豆,包括大豆、大青豆和黑豆,其中大豆營養價值最高,是食品中的優質蛋白質**; 此外,芝麻、瓜子、核桃、杏仁、松子等乾果的蛋白質含量較高。 由於各種食物中氨基酸的含量不同,其中所含的氨基酸種類,以及其他營養成分(脂肪、醣類、礦物質、維生素等)的含量也不同,因此,上述食物都是有的,蛋白質含量高的食物也可以根據當地特產和當地條件提供。
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自身蛋白具有識別、免疫、消化和運輸功能。 它也可以被消化做能量**細胞工作,也可以通過轉氨作用形成一些飛行的必需氨基酸。 如果你攝入蛋白質,除了功能之外,你還可以補充一些必需氨基酸。
因此,在喝牛奶之前,你應該吃一些保持低的東西,否則牛奶只會作為食物被吸收,不會真正發揮蛋白質的作用。
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它應該是窗體上控制項的宣告兩次,例如,您先更改了控制項的名稱,然後雙擊該控制項以顯示私有子。 ',然後您在原始程式中更改該控制項下的事件的名稱,我遇到了這個問題。