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Tris緩衝液是一種常用的生物緩衝液,具有以下理化性質和組成:
成分:Tris緩衝液主要由三羥甲基氨基甲烷(TriS)和鹽酸(HCl)或氫氧化鈉(NaOH)組成。 Tris 是一種有機化合物,具有乙個氨基和三個羥基,可以作為緩衝液的成分。
理化性質: 1)pH範圍:TRIS緩衝液的pH範圍通常在to之間,pH值可以通過新增鹽酸或氫氧化鈉來調節。
2)緩衝容量:TRIS緩衝液具有較大的緩衝容量,能夠在很寬的pH範圍內保持穩定的pH值。
3)離子強度:Tris緩衝液離子強度低,不會對生物分子造成明顯干擾。
4)溶解性:TRIS緩衝液易溶於水,能很好地溶解生物分子。
5)穩定性:TRIS緩衝液可在常溫下長期儲存,不易分解或變質。
目的:TRIS緩衝液主要用於生化實驗中保持pH值穩定,保證實驗結果的準確性。 例如,TRIS緩衝液可用作洗脫液、裂解液或蛋白質純化、DNA和RNA提取等實驗中的反應組分。
總體而言,TRIS緩衝液是一種穩定可靠的生物緩衝液,應用範圍廣泛。
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Tris-HCl緩衝液的製備方法:
將50ml三羥甲基氨基甲烷(TriS)溶液與x ml鹽酸混合後,用水稀釋至100ml即可成功配置。
三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)是一種有機化合物,分子式為(Hoch2)3CNH2。
Tris是一種弱鹼,在室溫下(25,其PKA為; 根據緩衝理論,TRIS緩衝的有效緩衝範圍介於to之間。
Tris鹼的水溶液在pH值左右,一般加入鹽酸,將pH值調節到所需值,即可得到該pH值的緩衝液。 但同時,也應注意溫度對Tris的PKA的影響。
使用:
TRIS緩衝液不僅廣泛用作核酸和蛋白質的溶劑,而且具有許多重要用途。 Tris用於不同pH條件下的蛋白質晶體生長。 TRIS緩衝液的低離子強度特性可用於線蟲(C
線蟲)層粘連蛋白中間纖維的形成。Tris也是蛋白質電泳緩衝液的主要成分之一,它與電泳緩衝液中的甘氨酸形成緩衝體系,以穩定電泳過程中的pH值。
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Tris HCl緩衝液的配方如下:
1. 1 M Tris-HCl(pH,製備 1000ml
準備:在1000毫公升燒杯中稱量Tris。 加入約800ml去離子水,攪拌均勻溶解。
加入下表中的濃縮HCl量以調節橡子的pH值。 將溶液加熱至1000毫公升。 高壓滅菌後,在室溫下儲存。
注意:溶液的pH值在凝固前應冷卻至室溫,因為Tris溶液的pH值隨溫度變化很大,溫度每公升高1次,溶液的pH值降低約乙個單位。
2. Tris-HCl(pH製備1000ml
凝視等製備方法:稱取tris,放入1000ml燒杯中。 加入約800ml去離子水,攪拌均勻溶解。
將pH值調節至濃HCl。 將溶液加熱至1000毫公升。 高壓滅菌後,在室溫下儲存。
注意:溶液的pH值在凝固前應冷卻至室溫,因為Tris溶液的pH值隨溫度變化很大,溫度每公升高1次,溶液的pH值降低約乙個單位。
3.TE為Tris-EDTA緩衝液(10mm Tris,1mm EDTA,製備方法:取下列溶液,置1000ml燒杯中。 1 M Tris-HCl緩衝液(,,500mM EDTA)(向燒杯中加入約800ml去離子水並均勻混合。
溶液固定至1000ml後,經高溫高壓滅菌滅菌。 在室溫下儲存。
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Tris-HCl是在Tris的基礎上製成的鹽酸鹽。
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Tris-HCl緩衝液的製備方法如下:
使用量筒或容量瓶測量所需的水。 根據實驗的需要,確定所需緩衝液的體積,並向容器中加入適量的水。 請務必使用純淨水或去離子水,以免雜質影響結果。
將 Tris 底座新增到容器中。 計算所需TRIS鹼的質量或體積,以實驗所需的濃度,然後緩慢地將其新增到攪拌水中。 請注意,Tris鹼的溶解度有限,因此建議在室溫下緩慢攪拌並等待其完全溶解。
調節pH值。 將鹽酸(HCl)滴加到緩衝液中,同時使用pH計監測溶液的pH值。 根據實驗要求,將pH值調節到所需範圍。
調節pH值時應小心,避免新增過多的鹽酸並導致溶液變得過於酸性。
攪拌並儲存。 使用磁力攪拌器或攪拌棒充分攪拌溶液,以確保組分混合均勻。 製備完成後,可以將緩衝液轉移到適當的容器中並根據需要儲存。
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Tris-HCl緩衝液的優點是:
由於TRIS鹼的鹼性很強,因此僅使用這種緩衝系統就可以製備從酸性到鹼性的廣泛pH值範圍的緩衝液;
對生化過程干擾小,不與鈣、鎂離子、重金屬離子沉澱。
其缺點是:緩衝液的pH值受溶液濃度的影響很大,緩衝液稀釋十倍,pH值的變化較大;
溫度效應大,溫度變化對緩衝液的pH值影響很大,即:
例如,緩衝液在4處的pH值和pH值在37處必須在使用溫度下製備,而在室溫下製備的Tris-HCl緩衝液不能用於0 4。
空氣中容易吸收CO2,因此配製的緩衝液應密封嚴密。
該緩衝液會干擾某些pH電極,因此請使用與TRIS溶液相容的電極。
壓力安全。
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