HPLC原理的良好解釋

基本原理是托盤理論，在很多地方都有詳細的解釋。

HPLC儀器通常由溶劑輸送系統、取樣系統、分離系統（色譜柱）、檢測系統以及資料處理和記錄系統組成。

1.溶劑輸送系統。

儲液器：用於儲存足夠量的符合要求的流動相。 配備溶劑過濾器，可防止流動相中的顆粒進入幫浦。

脫氣機：脫氣的目的是防止流動相在流出柱外時向檢測器中釋放氣泡，從而產生噪音而無法正常檢測。

輸液幫浦：儲液槽中的流動相在高壓下連續送入液體系統，使樣品在柱內完成分離過程。

梯度洗脫裝置：是一種在分離過程中通過逐漸改變流動相的組成來增加洗脫能力的裝置。

2.取樣系統。

進樣器：是將樣品送入色譜柱的裝置，進樣方式可分為閥門進樣或自動進樣兩種。 自動進樣器載入更為常見。

3.分離系統。

色譜柱：樣品的鉛分離是整個層析系統的心臟，其質量直接影響分離效果。

4.檢測系統。

檢測器：將連續流出色譜柱的樣品組分轉換為易於測量的電訊號，資料系統接收該電訊號，並生成樣品分離的色譜圖。

5.資料處理和記錄系統。

色譜資料被處理並參與HPLC儀器的自動控制。

原理：儲液槽中的流動相通過高壓幫浦注入系統，樣品溶液通過進樣器進入流動相，並由流動相（固相）載入到色譜柱中。

樣品濃度被分離成單獨的組分，這些組分依次流出色譜柱，樣品濃度被轉換為電訊號，並在通過檢測器時傳送到記錄儀，在那裡資料可以列印成地圖供研究人員分析。

HPLC代表高效液相色譜，英文全稱是High Performance Liquid Chromatography。 該方法在化學、醫藥、工業、農藝、商檢、法醫檢驗等領域被用作重要的分離分析技術。

用途：高效液相色譜法更適合於沸點高、熱穩定性差、生理活性較大、相對分子量較大的物質的分離分析，因此廣泛用於核酸、肽、內酯、熔融環芳烴、聚合物、藥物、人體代謝物、表面活性劑、抗氧化劑、農藥、除草劑等物質的分析。

原理：高效液相色譜法以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將不同極性的單一溶劑或混合溶劑、緩衝液等不同極性的流動相幫浦入裝有固定相的色譜柱中，柱內組分分離後進入檢測器進行檢測， 從而實現樣品的分析分離。

操作方法：如下圖所示，溶劑容器中的流動相被幫浦吸入，混合後由梯度控制器按一定梯度輸出，測量壓力和流量，在保護柱和分離柱測試後將進樣閥（裝置）引入檢測器， 資料由資料處理裝置處理或色譜圖由記錄儀記錄，餾分收集器收集餾分，廢液瓶收集廢液。

HPLC是高效液相色譜（高效液相色譜）。

高效液相色譜是色譜的乙個重要分支，它以液體為流動相，採用高壓輸液系統租用巧州系統，用不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩衝液。

將等流動相幫浦入柱中，並附有固定相。

柱中的組分分離後，進入檢測器進行檢測，以便對樣品進行分析。 該方法已成為分離分析技術在化學、醫藥、工業、農藝、商檢、法醫檢驗等領域的重要應用。

HPLC的特點：

1.高缺點：流動相是液體，當它流過塔時，它受到較大的阻力，為了快速通過塔，必須對載液施加壓力。

2.速度快：分析速度快，載液流速快，比經典液相色譜法快得多，通常在15-30分鐘內分析乙個樣品，有些樣品甚至可以在5分鐘內完成，一般不到1小時。

3、效率高：分離效率高。 與工業蒸餾塔和氣相色譜法相比，可以選擇固定相和流動相，以實現最佳解離效果。

分離效率高出許多倍。

4、靈敏度高：紫外檢測器可達，進樣量為l級。

5、應用範圍廣：70%以上的有機化合物可採用高效液相色譜法進行分析，特別是對沸點高、分子大、極性強、熱穩定性差的化合物進行分離分析，顯示出優勢。

HPLC根據各種化學相互作用分離混合物。 這種相互作用通常是分析物和分析柱之間的非共價性質。 使用HPLC時，液體分析物在不同時間注入色譜柱，在固定相中受壓移動，由於分析物中不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質依次離開色譜柱，通過檢測器獲得不同的峰訊號，每個峰代表不同型別的化合物， 最後，通過分析和比較這些訊號，分析物中含有物質。

以液體為流動相的色譜儀器稱為液相色譜儀。 具有高壓輸液幫浦、高效固定相和高壓靈敏檢測器的液相色譜儀成為高效液相色譜儀。 HPLC的種類很多，但不管是什麼型別的HPLC，基本上都分為4個部分：

高壓輸液器、注射系統、分離系統和測試系統。

簡單地說，樣品溶解在流動相中，與流動相一起進入色譜柱，並被固定相（填料）吸附。 樣品中不同組分的吸附方式不同，導致流柱的時間順序不同。

在反相色譜的情況下，固定相（二氧化矽烷烴填料）的極性低於流動相（乙腈、甲醇等）。 對於樣品中的每種組分，極性小的固定相的吸附力比較大，柱流動較晚，反映在光譜上，峰值較晚。

正相色譜法則相反。

HPLC是一種液相色譜方法，用於高壓輸送流動相，以實現快速高效的分離。