蛋白質分離和鑑定的常用方法有哪些？

常見的蛋白質鑑定方法有：

1.最簡單的方法是燒毀要識別的物體。

2.使用化學試劑鑑定蛋白質的化學反應。

第三，更準確的方法是使用儀器進行蛋白質鑑定，例如質譜儀，這在生物學研究中經常會遇到一些關於蛋白質鑑定的問題，例如鑑定單個蛋白質或簡單混合物; 單個蛋白質的序列分析等 這種型別的蛋白質鑑定要求很高，因此幾乎所有人都使用質譜儀器來準確鑑定蛋白質。

質譜是鑑定蛋白質的平台技術之一。 可用的質譜儀包括 Thermo Fisher 的 Q Exactive 質譜儀、LTQ Orbitrap Velos 質譜儀和 AB SciEx 的 6500 Q Trap 質譜儀。 硬體品牌的使用會因評估機構而異。

蛋白質鑑定的過程一般分為三個步驟：蛋白質提取、純化和鑑定。 這個過程是對蛋白質進行逐層“解剖”的過程，從中我們可以確定蛋白質的分子量，鑑定蛋白質膠點、珠子、IP樣品蛋白質，進行非變數質譜分析和下拉靶蛋白譜鑑定等，更詳細地分析蛋白質中的各種物質和性質。

1.燃燒產生的燒焦羽毛的氣味是蛋白質。

2.當濃 Hno3 變性時，黃色不溶物是一種蛋白質。

3.精製過濾，取濾液，先加入NaOH，再加入縮二脲試劑，有紫色反應，即為蛋白質。

一般來說，鑑定蛋白質的最簡單方法是在以下兩種情況下之一：

1.檢查固體物質：最簡單的方法是燃燒它們並聞聞它們是否有燒焦的羽毛的氣味，有些含有蛋白質，沒有不含蛋白質;

2.測試液體物質：最簡單的方法是在你周圍加入適量的食鹽或易得的可溶性鹽，攪拌均勻，看是否凝固。

根據蛋白質分子大小進行分離的主要方法有透析、超濾、離心和凝膠過濾。

透析和超濾是分離蛋白質的常用方法。

透析包括將要分離的混合物放入由半透膜製成的透析袋中，然後浸入透析液中進行分離。 超濾是利用離心力或壓力迫使水和其他小分子通過半透膜，而蛋白質被困在半透膜上的過程。

這兩種方法都可以將蛋白質大分子與以無機鹽為主的小分子分開。

它們通常與鹽析和鹽析方法結合使用，這兩種方法都可用於在鹽析或鹽析後除去引入的無機鹽。

在超濾過程中，濾膜表面容易被吸附的蛋白質堵塞，使超濾速度減慢，截獲物料的分子量越來越小。 因此，在採用超濾法時，需要選擇合適的濾膜，也可以選擇切向流過濾，以獲得更理想的效果。

1、鹽析和有機溶劑沉澱：在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽，破壞蛋白質的膠體性質，使蛋白質從溶液中析出，稱為鹽析。 常用的中性鹽有：

硫酸銨、氯化鈉、硫酸鈉等 鹽析時，溶液的pH值在蛋白質的等電點處效果最佳。 任何能與水按任意比例混合的有機溶劑，如乙醇、甲醇、丙酮等，都會引起蛋白質沉澱。

2. 電泳：蛋白質分子在高於或低於其 pi 的溶液中具有淨負電荷或正電荷，因此它們可以在電場中移動。 電泳遷移率的大小主要取決於蛋白質分子攜帶的電荷量和分子的大小。

3.透析法：透析袋膜的超濾效能可用於從小分子中分離大分子物質。

4.色譜法：利用混合物中各組分的理化性質差異，分離相互接觸的兩相（固定相和流動相）之間的分布。 主要有離子交換色譜法、凝膠色譜法、吸附色譜法和親和色譜法，其中凝膠色譜法可用於測定蛋白質的分子量。

5、分子篩：又稱凝膠過濾法，將蛋白液加入柱頂，讓它向下洩漏，小分子蛋白進入孔隙，因此在柱內停留時間長，大分子蛋白不能進入孔徑向流出，因此可以分離出不同大小的蛋白質。

6.超速離心：利用不同密度的物質，超速離心後，將它們分布在不同的液層中並分離。 超速離心也可用於確定蛋白質的分子量，該分子量與其沉降係數 s 成正比。