逆轉錄PCR的PCR步驟的目的

逆轉錄PCR：聚合酶鏈反應的一種廣泛使用的變體。

變性（90-96）：雙鏈DNA模板在熱作用下破壞氫鍵，形成單鏈DNA

2.退火（復性）（40-65）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合形成區域性雙鏈。

3.延伸（68-75）：在Taq酶的作用下（最佳活性在72左右），以DNTP為原料，從引物的5端和3端延伸，合成與模板互補的DNA鏈。

每個迴圈都經過變性、退火和拉長，DNA含量增加一倍。

現在，一些PCR可以改為兩步法，即退火和伸長在60-65之間同時進行，因為擴增區很短，Taq酶活性可以在很短的時間內複製，從而減少斜坡，提高反應速度。

方法。 在冰浴中，按以下順序將元件新增到無菌離心管中。

10×pcr buffer

5 μl dntp mix （2mm）

4 L 底漆 1（晚上 10 點）。

2 L 底漆 2（晚上 10 點）。

2 L Taq 酶 （2 U L）。

1 L DNA 模板 （50 ng-1 g L） 1 L 加 DDH2O 至 50 L

根據PCR儀器是否有熱蓋，不新增或新增石蠟油。

請點選輸入描述。

調整反應程式。 離心混合物並立即將其放在PCR儀上進行擴增。 常規：

在93預變性3-5分鐘時，進入迴圈擴增階段：93 40s 58 30s 72 60s，30-35 個迴圈，最後在 72 保持溫暖 7 min。

請點選輸入描述。

在反應結束時，將PCR產物放置4年，通過電泳檢測或-20年儲存。

請點選輸入描述。

PCR電泳檢測：反應管中加入石蠟油時，用100L氯仿提取反應混合物，除去石蠟油; 否則，直接取5-10L電泳。

end<>

請點選輸入描述。

1.溫度不同，PCR是在體內進行的，並且要經歷三種不同的高溫，而體內DNA複製是在溫和的溫度條件下進行的。

2.酶不同，DNA複製需要普通的DNA聚合酶和解旋酶。 PCR技術需要熱穩定的DNA聚合酶，不需要解旋酶。

3.引物不同：PCR技術純引物是人工新增的DNA單鏈，而體內DNA複製是在細胞中合成的一段RNA鏈。

如果是，則與轉錄存在許多差異。

滿意，謝謝，祝你進步！