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正常質粒是閉合的雙鏈DNA。 在電泳過程中,質粒可以開環,或者開環螺旋可能變為線性。 這三種形式在電泳過程中具有不同的分離速率和不同的分離速度,並分為三個帶。
閉環(超螺旋)、開環和線性形狀的螺旋線依次減小。 (開環質粒是指部分溶解的雙鏈環狀質粒DNA,因此電泳速度較慢) 瓊脂糖電泳中三種構象質粒的順序是超螺旋“線性”開環,線質粒在中間,開環質粒在末端。
質粒好壞的乙個指標是所有質粒中超螺旋質粒的含量。
質粒DNA有三種不同的構型:OC構型、L構型和SC構型。 電泳的前面是SC配置。
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質粒DNA電泳的特點: DNA顯色條帶數:質粒DNA電泳有3條帶; 基因組DNA應該只有乙個或兩個條帶。 因為:
基因組 DNA 電泳通常為 1 條帶,但它也可能在提取過程中斷裂,形成數十到數百 kb 的大片段。 但是我們一般使用1%的膠水,它無法區分不同大小的DNA,所以它看起來像一條帶子。 如果在配製好的膠水中加入耐磨達印地記號筆,並適當延長膠水執行時間,則應有幾條帶。
意義:
DNA純度,緩衝液。
溫度條件和限制性內切酶。
本身影響限制性內切酶的活性。 大多數限制性內切酶不受 RNA 或單鏈 DNA 的影響。 當微量汙染物進入限制性內切酶原液時,會影響其進一步使用,因此每次抽吸限制性內切酶時都應使用新的移液器吸頭。
如果使用兩種限制性內切酶,則必須注意為每種內切酶提供最佳鹽濃度。
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凝膠電泳由於分子篩和電荷的相互作用而分離不同長度的DNA。
首先,凝膠內部有孔隙,從中分離出DNA,形成篩狀孔徑。 DNA的分子量越高,它在凝膠中游動的速度越慢,DNA的分子量越小,它在凝膠中游得越快。 不同長度的DNA意味著不同的分子量,因此不同的激增位置。
其次,DNA分子在高於等電點的pH溶液中帶負電,在電場中向正極移動。 由於糖磷酸骨架的結構重複性,相同數量的雙鏈DNA具有幾乎相同數量的淨電荷,因此它們可以以相同的速率向正極移動。
分子篩效應和電荷效應可導致不同電泳位置不同大小的DNA分離
語言:王國偉的《天下之詞》,高中教材閱讀版選了這篇文章。 第乙個境界是宋代燕樹的《喜鵲踩枝》,“昨夜西風吹綠樹枯,獨自上西樓,望著天涯海角”; 第二個境界是劉勇在宋代的《蝴蝶愛情花》,“為彝族使人憔悴,衣裳腰帶漸加寬,不後悔”; 第三個境界是南宋辛七極的《青玉案》,“眾人尋他千百,忽然回頭一看,人卻在燈火中。 >>>More
光速。 光速是公里每秒,我們物理或數學學習中的一些算術題往往直接拿來是每秒30萬公里,所謂光速是指光在真空或某種介質中傳播的速度,我們知道光在真空中傳播時,速度是最快的。 >>>More