要對微生物進行實驗，如何採集土壤樣本？

去乙個有代表性的地方取下它，然後用無菌水用玻璃球打打它並塗在盤子上。

有許多微生物可以分解纖維素。 既有好氧微生物，也有厭氧微生物; 有細菌、放線菌和真菌。

需氧纖維素分解細菌：纖維菌屬和孢子纖維菌屬是土壤中常見的需氧纖維素分解菌。 多囊屬、鐮狀屬和纖維弧菌屬。

許多放線菌能夠分解纖維素。 土壤放線菌能分解纖維素，包括白鏈黴菌、灰鏈黴菌、紅鏈黴菌等。 放線菌分解纖維素的能力比細菌和真菌弱。

許多真菌具有很強的分解纖維素分解的能力。 其中，主要有木黴屬、鐮刀菌屬、青黴屬、麴黴屬、毛黴屬和灰孢子菌屬。在森林的凋落物中，主要的纖維素分解細菌是擔子菌。

在潮濕的土壤中，真菌也是纖維素分解的主要菌群。

厭氧纖維素分解微生物主要是一些梭狀芽孢桿菌孢子，如澳氏梭菌，以及一些與澳氏梭菌差異很大的嗜熱性菌種，如熱纖維梭菌、溶菌梭菌等。

可以使用剛果紅染色法分離微生物。

（1）採集植物，去除根系周圍鬆散的土壤，仍附著在根系表面的視為根際土壤。 將植物放入裝有冰袋或乾冰的培養箱中，避免光照，並將它們運回低於 0 的實驗室;

2）準備無菌容器，將植物根部置於緩衝液（PBS或生理鹽水）**中，根據樣品實際情況調整時間和強度，洗去根際土壤;

3）洗滌液高速離心收集土壤沉積物，如果沉澱較少，也可過濾膜，將同一方格取樣的樣品多點等量混合;

4）將樣品分裝到離心管中，密封，標有樣品資訊，用液氮冷凍，儲存在-80冰箱中，用乾冰送去。

為了從土壤中分離出單個菌落微生物，方案如下：

1、牛肉醬蛋白腖培養基的製備：牛肉糊蛋白腖瓊脂培養基500ml的製備（12平板10試管斜面）。 將 12 塊板和 10 個試管倒入斜面中，包紮，滅菌 121 分鐘，持續 20 分鐘

2.土壤稀釋劑的製備：稱取土壤試樣10g，放入裝有玻璃珠的三角瓶中，盛有100ml無菌水，搖勻10min，使土水充分混合。

然後用移液管從三角瓶中吸出1ml（此操作需要無菌操作），將其加入另乙個裝有9ml無菌水的試管中，混合均勻，依此類推0001 不同稀釋度的土壤溶液。

3.包衣培養：取兩種濃度的土壤稀釋液作為包衣板培養的物件，包衣在3種牛肉醬蛋白腖培養基中，共6種培養基，標記，在37°C培養箱中培養48 h。

4.劃線分離（劃線培養）：觀察兩種土壤溶液的微生物培養基，記錄兩種不同的細菌性狀。 將這兩種細菌劃線並在新培養基（每種細菌培養物 3 個培養皿）中培養，標記並在 37°C 下孵育。

5.初步鑑定：對2個細菌進行簡單染色、革蘭氏染色和孢子染色，並記錄結果。

6.試管傾斜復培養：將兩種純菌株接種在5個試管中，共10個試管。 在37°C孵育（18孵育24小時）。

7.試管中培養的兩種細菌的生理生化鑑定。

1.根據研究設計選擇有代表性的土壤，並確定取樣點。 了解該地區的生物氣候條件，確定取樣時間，避免在雨季取樣。

2、選擇未受人為干擾的區域，施肥前應採集耕地樣本。

3、取樣時，需要調查記錄土壤、生物、氣候等環境因素，如地形、植被、土壤剖面結構、土壤水熱條件、pH值、有機質含量等

4.所有工具、塑膠袋或其他物品應事先消毒或用取樣時取的泥土擦拭。

5、取樣程式如下：清除地面植被和凋落物; 去除表土約1cm表面; 取等重的土多點攪拌，除去礫石等雜質，再取一定量的土裝袋; 取樣深度根據研究設計確定，在同一剖面的層中取樣時，應先取下層土壤樣品，挖出剖面後再取上層土壤樣品，避免上下混雜。

土壤取樣通常在上午 9 點在合適的位置進行，用鏟子去除表層土壤，並去除離地面 10 至 15 厘公尺的土壤。 然後放入無菌塑膠袋中，密封好，並用記號筆標註取樣的時間、地點等基本情況，以備後用！

1.取樣，選擇取樣位置，使用5點取樣，四個角增加2個中心樣品處理，搗碎，加入適量蒸餾水，攪拌均勻，靜置30 min3吸出上清液，即細菌懸浮液。

4.細菌溶液的連續稀釋。

5.塗層平板。

6.培養、觀察菌落、計數等。

1）本實驗為對照實驗，從圖中不難看出，A罐和B罐的唯一區別是A瓶中的土壤經歷了強熱，而B瓶中的土壤沒有經歷過強熱

2）由於B罐土壤中存在微生物，微生物會回流產生二氧化碳，使B瓶中澄清的石灰水渾濁;罐子 A 中的土壤經過熱處理以殺死微生物，因此在瓶 A 中找不到任何變化

3）本實驗的目的是，如果土壤中有微生物，微生物呼吸作用會產生二氧化碳，從而使澄清後的石灰水渾濁，從而可以證明土壤中存在微生物

因此，答案是：（1）試管A中的土壤被加熱，而試管B中的土壤沒有被加熱;

2）試管A無變化，試管B中澄清的石灰水變渾濁;

3）澄清後的石灰水變得渾濁，表明土壤中存在微生物呼吸並釋放二氧化碳;斯威夫特日曆。

一般生理生化試驗與16SDNA試驗相結合，第一種是對得到的微生物進行初步染色，以確定微生物的基本形態特徵。

1.生理生化檢查。

1）糖發酵氧化試驗：在細菌的分類鑑定中，糖發酵氧化的測定是重要依據。特別是，細菌的鑑定尤為重要。

常用的發酵氧化糖包括單醣、雙醣和多醣：葡萄糖、蔗糖、澱粉等。 醇類包括五醇、六醇; 如金盞花醇、甘露醇等; 糖苷主要包括水楊苷等。

大多數細菌都可以利用糖作為能量和碳源，但由於不同細菌體內酶的差異，發酵和氧化糖的能力不同。 有些人可以利用這一點，而不能，而有些人則恰恰相反; 有的能在糖的發酵和氧化代謝中分解糖分，產生酸和氣體，有的只能產生酸而不能產生氣體。 無論是否產生酸，無論是發酵還是氧化產生，都可以用預先新增到培養基中的指示劑（溴百里酚藍水溶液）來表示。

這樣，菌株的培養基在厭氧或良好條件下培養，培養基由綠色變為黃色進行產酸，通過觀察培養基中是否有氣泡或介質破裂來確定是否產生氣體，例如破裂或氣泡以證明氣體的存在。

2）過氧化氫酶測定 區分乳酸菌和許多厭氧菌與其他細菌的主要依據是確定過氧化氫酶的存在與否。過氧化氫酶又稱接觸酶，能將過氧化氫分解成水和氧氣，氧分子變成氣泡並流出，為過氧化氫酶陽性。 乳酸菌和許多厭氧菌在過氧化氫試驗中呈陰性。

3）細胞色素氧化酶測定 細胞色素氧化酶是氧化酶之一，有時人們習慣於將細胞色素氧化酶稱為氧化酶，因此細菌分類鑑別中的氧化酶是指細胞色素氧化酶。在右分子氧和細胞色素C存在下，細胞色素氧化酶能氧化二甲基對苯二胺（氨基二甲基苯胺），使其呈玫瑰紅至暗紅色，並在此基礎上與A-苯酚結合生成吲哚酚藍，出現藍色。

2、16SDNA鑑定。

與生理生化檢測相比，16SDNA鑑定非常快速簡單，通過生物種類的初步測定、保守PCR引物的設計、微生物的PCR轉殖、轉殖基因序列的分析，可以快速確定哪種微生物是特異性的。