細胞培養的培養條件，細胞培養的基本操作

在細胞培養過程中，有專門的精確檢測裝置用於檢測氧氣和二氧化碳，請參考**-上海永州實驗裝置****。

最近，筆者一直在培養人臍靜脈內皮細胞（HUVECs），以記錄志橋在細胞培養中的一些基本操作。

從37°C下裝有5%CO2的培養箱中取出細胞培養瓶，先觀察燒瓶內液體是否渾濁（渾濁表明細胞可能被汙染），然後在顯微鏡下觀察細胞的生長情況，當細胞長度超過70%時，即可傳代。

在25ml培養瓶中加入3ml PBS，洗滌兩次，然後加入胰蛋白酶（實驗室使用的仙人掌胰酶更溫潤銀），放入培養箱中消化3-5min（保證細胞消化），加入培養基（ECM）2ml停止消化。 將液體收集到離心管中，以350g離心5min（使細胞沉澱），然後除去上清液，在離心管中加入6ml ECM，將細胞吹勻（吹入單細胞），向三個25ml燒瓶各加2ml，然後在燒瓶中加入培養基至6ml。

25ml燒瓶中的細胞充滿後，用3ml PBS洗滌兩次，胰蛋白酶消化後離心，棄去上清液，加入培養基和500L DMSO（10%），將細胞吹勻，分裝成5個冷凍劑中，每個冷凍劑1ml，放入-80冷凍儲存中。

將凍存的細胞從-80或液氮中取出後，立即放入37°C溫水中（注意液氮是否洩漏到冷凍儲存管中），解凍後，以350g離心5min，棄去上清液，加入1ml ECM，吹幹細胞，加25ml培養瓶，補出ECM至6ml。

注意： a. 培養瓶蓋應通過酒精燈，培養瓶蓋不宜擰緊;

二。 75ml燒瓶為10ml培養體系，加胰蛋白酶消化，4倍用量培養基終止消化; 6孔板為培養系統（胰蛋白酶化），12孔板為2ml培養系統（胰蛋白酶化），24孔板為1ml培養系統（胰蛋白酶化），96孔板為100L培養系統（1滴胰蛋白酶消化）。 加入胰蛋白酶後，輕輕搖動燒瓶或培養板，使胰蛋白酶覆蓋貼壁細胞;

三。 用於清洗的PBS量是介質量的一半;

四。 25毫公升燒瓶中裝滿細胞，大約有乙個細胞;

五。 Huvec 在第 4 代之後不再可用。

細胞培養的目的和用途：

1.科學研究。

藥物研發，如新藥篩選、疫苗、基因工程藥物、細胞工程藥物、研發、單轉殖抗體生產等。 基礎研究，如藥物作用機制、基因功能、疾病發病機制等。

2.生物製藥。

疫苗生產：如病毒疫苗（肝炎病毒疫苗、愛滋病疫苗等）、多肽疫苗（腫瘤疫苗）等。 基因工程藥物的生產：如EPO等。 抗體藥物和基因藥物的生產。

細胞工程藥物生產：生物細胞中的一些生物活性多肽、生物活性物質等。 通過細胞法體外測定生物活性物質的活性; 以及其功效在體內和替代體內檢測其成品的生物活性的方法。

細胞培養的目的和用途，主要用於：

相關實驗，以原代細胞為例，不僅廣泛應用於分子、細胞生物學和生物學的基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞系（系）研究、DNA、RNA和遺傳學研究，而且可以應用於當今流行的生物醫藥行業，如藥物篩選、藥物代謝與毒理學研究、癌症藥物研究、 等。

希望對你有所幫助！

細胞培養首先分為原代培養和傳代培養。

原代培養需要從組織中消化、分離和純化單細胞，然後進行傳代和冷凍儲存。

亞文化優先：

細胞回收率：1應遵守慢速凍融的原則。 首先，將水溫調節到37-38度，取出冷凍儲存的細胞，迅速放入後部細胞表面，浸入水面以下，不斷搖晃直至融化。

2.將完全培養基加入無菌臺的培養瓶中，然後用無菌移液管從凍存管中取出細胞，在培養瓶中輕輕搖動，使細胞在培養箱中均勻培養，24小時後更換液體; 也可在離心時（1000rpm下約5min）復活，完成培養基重懸培養，及時更換。

細胞傳代：1貼壁細胞：

對於貼壁細胞，應先吸入（倒入）培養基，吸吮越乾淨越好，以免中和後新增的消化液，從而削弱強度。 PBS洗滌2-3次，除去血清和死細胞，加入50ml燒瓶加入消化液中約，按此比例消化，（根據製備強度經驗），搖勻使消化液均勻鋪展在37度培養箱中約2分鐘，細胞收縮後變圓或幾脫落， 輕輕振動瓶底，使細胞全部脫落，加入2-3ml完全培養基，輕輕移液使細胞基本形成單一懸浮液，然後收集離心（1000rpm，約5min），用新鮮培養基重懸沉澱，加入完全培養基，繼續培養或實驗。

2.懸浮細胞：

如果需要高濃度或需要更換新培養基，可以離心（1000rpm，約5min），然後加入完全培養基，輕輕吹勻，然後將完全培養基加入其他培養瓶中繼續培養。

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細胞培養的基本方法是貼壁培養、懸浮培養和固定培養。 貼壁培養主要適用於貼壁依賴性細胞。 這些需要在相互依存的化學非活性物質（玻璃或塑料等非活性物質）的表面上生長、存活和維持，並最終生長到粘附表面上的單層，當表面覆蓋有平坦的表面時，就會發生接觸抑制。

**血液中的細胞、淋巴組織、許多腫瘤細胞（包括雜交瘤細胞）和一些轉化的細胞屬於懸浮培養細胞，細胞是非貼壁依賴性細胞，沒有支撐面，細胞或細胞聚集體懸浮在液體培養基中進行增殖。 懸浮培養是大規模細胞培養的理想選擇，可以以類似微生物的方式進行。 動物細胞比微生物更脆弱，容易受到剪下力的影響，而細胞固定化技術可以更好地保護細胞免受機械力和環境變化的影響，提高細胞耐受性，促進高密度細胞培養，提高目標產物的產量。

植物雀細胞培養需求（）。

a.血清。

b.無機鹽和微量元素。

碳水化合物襪軸。

正確答案：B