石蠟切片的詳細工藝及注意事項

製作石蠟切片的步驟如下：

1.組織包埋。

1）乙醇脫水：用不同濃度的乙醇溶液逐步對組織進行脫水，使用各級乙醇40min（注：骨和鈣化組織需在JYBL-脫鈣液中浸泡24小時，待組織軟化後再進行乙醇脫水步驟）;

2）透明度：將組織依次浸泡在三個二甲苯中，每個圓柱體浸泡1h;

3）蠟浸泡：將組織依次浸泡在三個石蠟圓筒中，每個石蠟圓筒浸泡1小時;

4）包埋：將液體石蠟倒入模盒中，然後將浸泡在蠟中的紙巾塊放在底部，注意切割面的方向並向下放置，待石蠟凝固後取下包埋框架，待蠟塊完全冷卻硬化後再修整， 並且適度保留組織周圍的石蠟進行切片。

2、切片製作：將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上，使蠟塊的切割面平行於刀口，刀的傾斜度通常為15，旋轉推進器旋轉推進器，將切片厚度調整到4m，切成厚度均勻的切片。

左手握住毛筆，右手旋轉切片，拿起機器轉動，切片取出後，用刷子輕輕舉起，然後用鑷子輕輕鑷子將蠟片鑷子，放入正面的展箱中，其水溫約為45。 壓平後，取出切片。 用左手附上切片，握住載玻片的一端，垂直入水中附上切片，用右手推動切片，附上載玻片的三分之二。

切片附上後，放在空氣中稍微乾燥，放在65烘烤機上1小時，然後放入烤箱中烘烤2小時。

3.將石蠟切片脫蠟到水中。

依次將石蠟切片放入二甲苯、10min二甲苯、10min二甲苯、10min無水乙醇、5min無水乙醇、5min-90%酒精、5min-80%酒精、5min-70%酒精、5min-50%、5min-50%酒精、5min-50%酒精中，5min梯度脫蠟。

4.HE染色。

石蠟切片用蘇木精染色分鐘，用自來水沖洗，用1%鹽酸醇分化幾秒鐘，用自來水沖洗，然後用1%氨水溶液恢復藍色1min，用流水沖洗幾秒鐘，用曙紅染色液染色幾秒鐘，用流水沖洗。

5.脫水密封。

將石蠟切片依次放入75%乙醇2min-85%乙醇2min-無水乙醇5min-無水乙醇5min-二甲苯5min透明中，切片從二甲苯中取出，用中性膠覆蓋。

6.結果的解釋。

細胞核是藍色的，細胞質是紅色的。

石蠟切片法包括材料提取、固定、洗滌脫水、透明、蠟浸、包埋、切片和修補、脫蠟、染色、脫水、透明和鑲嵌等步驟。

材料：材料必須新鮮，如果放置時間過長，會引起蛋白質分解變性，導致細胞自溶和細菌生長，但不能反映組織在活著時的形態結構。

固定：將固定液浸漬成切成小塊的新鮮材料，盡可能保持其活體時的結構。 固定液的用量通常為材料塊的20倍左右，固定時間取決於材料塊的大小和鬆散程度以及固定液的滲透速度，範圍從1小時到幾天不等，通常為1小時到24小時。

洗滌脫水：固定後，應清除組織中殘留的固定液及其結晶沉澱物，否則後期會影響染色效果。 酒精是一種常用的脫水劑，為了減少組織材料的急劇收縮，應按從低濃度到高濃度遞增的順序進行，通常從30%或50%的酒精開始，一直工作到%，直到純酒精（無水乙醇）一次1小時。

透明度：常用的澄清劑有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各種澄清劑都是石蠟的溶劑。 澄清劑的浸漬時間取決於組織材料的大小以及它是否屬於囊腫腔或實體器官。

如果透明時間太短，透明度不完全，石蠟難以浸入組織中; 如果透明時間太長，組織會變硬變脆，很難切掉整個切片，可以持續長達幾個小時。

蠟浸漬和包埋：通常將組織材料塊浸入等量的熔融石蠟和二甲苯混合物中1 2小時，然後移入2熔融石蠟液中約3小時，蠟浸漬應在高於石蠟熔點約3的溫度箱中進行，以利於石蠟浸入組織中。 將蠟浸漬的組織材料塊放置在裝滿蠟溶液的容器中以製成蠟塊。

切片：將準備好的蠟塊安裝在石蠟切片機上，例如 Revolde S700 樣品頭進行切片，切片厚度通常為 3 8um。 切好的切片用刷子卷起來，在水溫約為 45 的撒布機中輕輕鋪開。

貼片和烤盤：將一定長度的蠟條（連續切片）或用鑷子掰成單片蠟片，壓平，然後取出到載玻片上放入45培養箱中晾乾，或在37烘箱中晾乾，但需要適當延長。

切片脫蠟和水化：乾燥的切片需要脫蠟和水化，以在水溶性染色劑中染色。 用二甲苯脫蠟。

染色：目的是使細胞組織內的不同結構呈現出不同的顏色，以便於觀察。

切片脫水、透明、封片：染色切片需梯度醇脫水，95%和純酒精中的時間可適當延長，保證完全脫水; 如果染料是用酒精製備的，則應縮短在酒精中的時間，以避免脫色。 二甲苯透明後，迅速擦去材料周圍多餘的液體，滴加適量（1 2滴）中性膠，並用蓋玻片蓋住載玻片。

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石蠟切片。 生產工藝主要包括：物料提取、固定、脫水、透明、滲蠟、包埋、切片、修補、染色、透明、封口等步驟。

1 成分。 材料的質量直接影響切片的質量，無論採用哪種動植物材料，都必須注意以下幾點。

1）植物材料的選擇不得盡可能損壞植物體或所需部位;使用動物材料時，動物常被麻醉，常用麻醉劑。

有氯仿和乙醚，或者在動物被殺死後迅速去除所需的組織。

2）材料必須是新鮮的，這對於從事細胞生物學的人來說是必不可少的。

特別重要的是，應盡可能多地去除活組織塊，然後注射固定液。

3）切割材料時，刀應鋒利，以免因擠壓電池而損壞。

4）切割材料應小而薄，使固定劑能迅速滲透到內部。一般厚度不超過2mm，尺寸不超過5 5mm2。

2 固定。 組織和細胞離開身體後，會繼續存活一段時間，引起病理變化，直到死亡。 為了使標本在其一生中反映其正常狀態，有必要盡快用某些化學物質快速殺死組織和細胞，抑制這些變化，並將結構成分轉化為不溶性物質，以防止某些結構的溶解和消失。

這種處理是固定的。 除了上述效果外，固定劑還可以適當地硬化組織以進行後續處理，改變細胞內的折射率並使某些部分易於染色。

固定劑主要用於蛋白質，一般生產中不考慮脂肪和糖等其他成分，如果要觀察這些物質，可以用特殊方式固定。

固定劑的作用表現在材料體積的變化，硬化程度，滲透速度和對染色的影響。 這些影響的質量和大小取決於被固定材料的性質，相同的固定溶液對一種材料有好處，但可能不太適合其他組織。 乙個好的固定劑必須具備的特徵是：

滲透到組織中的速度很快。 能將細胞內的內含物凝結成不溶性物質，不使組織膨脹或收縮以保持其原形，組織的硬化程度適中，增加細胞內含物的折射力，增加媒染和染色能力，並具有防腐劑的作用。 固定劑分為簡純固定劑和混合固定劑。

簡易固定劑是單一固定劑，常用乙醇。

甲醛、冰醋酸。

汞、苦味酸、鉻酸、重鉻酸鉀和鋨酸。 其中苦味酸、汞和鉻酸能凝固細胞白蛋白。

它還可以凝固核蛋白; 乙醇只能凝固白蛋白，而醋酸只能凝固核蛋白; 甲醛、飢餓酸和重鉻酸鉀不會凝固任何一種蛋白質。

在教學中，在光學顯微鏡下。

觀察切片標本大多採用石蠟切片製備。 離開身體後，組織很快就會死亡並引起組織腐爛，並失去其原有的正常結構，因此應將組織固定、石蠟包埋、切片和染色，以避免細胞組織死亡，並能清楚地識別其形態結構。

優點：1、組織細胞形態清晰。

2.切片可長期儲存，用於教學、科研、病理診斷和複查，可用於其他專案的回顧性研究。

3.可切（2 3微公尺）薄片，**薄而均勻，無皺紋。

缺點： 1、石蠟生產程式和環節很多，乙個週期需要幾天時間。

2.在生產過程中容易引起組織抗原性的喪失，在用於免疫組化染色時影響結果的靈敏度。

石蠟切片。

Baiparaffin Section）是傳統貧鈾生產技術中應用最廣泛的DAO方法。石蠟切片不僅用於觀察正常細胞組織的形態結構，而且是病理學和法醫學中用於研究、觀察和判斷細胞組織形態變化的主要方法，在許多其他學科中也得到了廣泛的應用。

石蠟切片法包括材料提取、固定、洗滌脫水、透明、蠟浸、包埋、切片和膠片、脫蠟、染色、脫水、透明、鑲嵌等步驟。 一般來說，從組織固定到載玻片密封需要幾天時間，但標本可以長期儲存，是永久性的微載玻片標本。

1.切片機應平整放置，切片刀和蠟塊應安裝牢固，否則切片會因振動而起皺或厚度不均勻。

2.切片時，應及時清洗刀口，清除蠟屑，否則容易造成切片斷裂。

3.切片刀與蠟塊切割面的傾斜角度應為5度至10度，如果過大，切片會捲起，不易將破裂的橡膠連線成蠟帶; 如果太小，就會起皺。

4.切片時，搖動轉輪的速度不宜過快，受力應均勻穩定。

5.展覽期間的水溫在42度到48度之間，45度是最佳的。

6.及時清理水中的蠟屑和其他雜物，防止各部分受到汙染。