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我不知道,我只是在看。
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溶液 2 中的主要成分是 NAOH 和 SDS,用於裂解細胞。 因為Naoh遇到了二氧化碳。
易反應生成碳酸氫鈣。
影響使用效果,所以現在應該使用。 在SDS的情況下,降水很可能發生在低溫下。 但是,在37°C下進行水浴是可以的。 主要問題是NAOH。
溶液1主要是讓細胞完全懸浮在溶液中,這沒有實際意義,可以省略。
溶液 2 是鹼液,目的是完全破壞細胞膜。
釋放核酸。 溶液3為酸性鉀鹽。
溶液溶解,目的是中和鹼度並沉澱SDS,以及蛋白質和大線性DNA。
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加入鹼裂解法提取質粒DNA的溶液後,一溶液、二溶液、三溶液,它們的現象不同,可以看出,造成明顯差異的原因是它們的反應過程不同,化學反應也不同。
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葡萄糖使懸浮的大腸桿菌不會迅速沉積到管底; EDTA是Ca2+、Mg2+等二價金屬離子的螯合劑,其主要目的是螯合二價金屬離子,達到抑制DNase的活性。 RNase A 可新增到酶切 RNA 中
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具體來說,這些現象應該是分解現象,原因應該是一些化學變化。
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你和你一樣,你和你一樣,你必須見到你,參加考試很容易。
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加入溶液一溶液和溶液二溶液,通過鹼裂解法提取質粒DNA,三次後會產生許多現象。
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答] :(1)溶液的主要成分是葡萄糖和EDTA。葡萄糖可以增加溶液的粘度,防止殘留的DNA通過機械作用降解。 EDTA螯合Mg2+
Ca2+和其他金屬離子抑制DNA被DNase降解(DNase需要某些金屬離子作為輔因子)。
2)溶液的主要成分是氫氧化鈉(NaOH),在pH 5 9的溶液中穩定,但當pH值為12或pH 3時,會引起DNA雙鏈體間氫鍵的解離和變性。溶液中NaOH的濃度是,加入溶液後,系統的pH值為,從而促進染色體DNA和質粒變性為單鏈。 SDS是一種陰離子洗滌劑,其主要功能有:
將脂肪和蛋白質溶解在細胞膜上,從而溶解膜蛋白並破壞細胞膜; 細胞中核蛋白的解聚,將蛋白質與DNA分離; SDS可以與蛋白質結合形成SDS-蛋白質複合物,使蛋白質變性並沉澱。 SDS抑制核酸酶的作用並防止DNA降解。
3)該溶液的主要成分是KAC(. 所用的KAC溶液是將溶液的pH值調節為中性,使變性的質粒DNA可以重新摺疊並穩定地呈遞。 高鹽3mol L醋酸鉀(KAC)有利於變性大分子染色體DNA、RNA和SDS-蛋白複合物的縮合和沉澱。
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一般來說,如果您在使用鹼性裂解提取後遇到質粒 DNA 降解的情況,您可以嘗試一些潛在的解決方案。 首先,您應該確保為特定質粒使用正確濃度的鹼基,並仔細遵循提取方案。 如果您不確定正確的濃度或方案,則應參考製造商提供的方案或參考特定質粒的方案指南。
其次,您可以嘗試使用不同的提取方法。 質粒DNA提取有許多不同的方法,每種方法都有自己的優點和缺點。 鹼性水解的一些常見替代方法包括機械破碎、酶消化和離子交換色譜。
第三,您可以嘗試不同的方法在提取後純化質粒DNA。 有許多純化方法可供選擇,每種方法都有自己的優點和缺點。 例如,您可以嘗試使用乙醇沉澱、柱組純化或凝膠電泳來純化質粒DNA。
總之,解決這個問題的關鍵是仔細評估您的方案並嘗試不同的方法,直到找到適合您特定質粒和提取條件的方法。 向其他研究人員或知識淵博的實驗室技術人員諮詢建議和指導也可能有所幫助。