高速逆流色譜儀的原理

1.逆流色譜法是在 20 世紀 50 年代從多極萃取技術（不連續性）發展起來的。

但多極萃取裝置體積大、複雜、易碎，溶劑體系易乳化，溶劑消耗量大，分離時間長。

2.由旋轉和旋轉（同步行星運動）產生的二維力場將兩相之一保留為靜止相。

導讀：高速逆流色譜是一種液-液層析分離技術，其固定相和流動相均為液態，無不可逆吸附，具有無樣品損失、無汙染、效率高、製備分離速度快、製備量大等優點。 由於HSCCC與傳統分離純化方法相比具有明顯的優勢，該技術已廣泛應用於中藥成分分離、保健食品、生物化學、生物工程、天然產物化學、有機合成、環境分析等領域。

我國是繼美國、日本之後第乙個開展逆流色譜應用的國家。 張天佑等在國內率先研製出分析製備高速逆流色譜儀，在我國中藥功能成分的分離製備方面取得了顯著成果。 上海通天生化科技有限公司生產的高速逆流色譜儀，分離中藥成分純度達99%，可用於HPLC檢測標準品。

高速逆流色譜法是20世紀80年代發展起來的一種連續高效的液-液分配色譜分離技術，不使用任何固體載體或載體。 它使用兩相溶劑體系在高速旋轉螺旋管中建立特殊的單向流體動力學平衡，其中一相作為固定相，另一相作為流動相，在連續洗脫過程中保留大量固定相。

高速逆流色譜常用基本溶劑系統表 待分離物質的種類 基本兩相溶劑系統 輔助溶劑 非極性或弱極性物質 正己烷-甲醇 氯代烴 正己烷-乙基氯代烴 正己烷-甲醇（或乙基）-水 氯烷烴 中等極性物質 氯仿-水 甲醇、正丙醇、異丙醇 乙酸乙酯-水 正己烷、甲醇、正丁醇 極性物質 正丁醇-水 甲醇、乙酸上表列出了一些基本溶劑體系，根據分離物質的極性可以作為參考，包括非水體系和水體系。

溶劑體系的選擇對於HSCC分離至關重要。 遺憾的是，到目前為止，溶劑體系的選擇還沒有足夠的理論依據，而是基於實踐中積累的豐富經驗。 一般來說，溶劑體系應滿足以下要求：

溶劑體系不會引起樣品的分解或變性，樣品中各組分在溶劑體系中都有合適的分配係數，一般認為分配係數在範圍內比較合適，各組分的分配系數值應相差充分，分離係數應大於等於; 溶劑系統不會干擾樣品的檢測; 為保證固定相保留率不低於50%，溶劑體系分層時間不大於30秒; 上下相的體積比適當，避免浪費溶劑; 應盡量使用揮發性溶劑，以利於後續處理，盡量避免使用有毒溶劑。 根據溶劑體系的極性，可分為弱極性、中極性和強極性三類。 經典的溶劑體系包括正己烷-甲醇-水、正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水、氯仿-甲醇-水和正丁醇-甲醇-水。

在實驗中，應根據實際情況，總結分析並參考相關專論和文獻，從待分離物質的類別出發，尋找相似的分離例項，選擇極性合適的溶劑體系，調整各種溶劑的相對比例，確定目標組分的分配係數， 最後選擇合適的溶劑體系。

高速逆流色譜（HSCCC）是一種不使用任何同晶載體的液相色譜技術，其原理是基於旋轉螺旋管中組分的相對運動和不混溶的兩相溶劑之間的不同分布來獲得分離，其分離效率和速度可與HPLC相媲美。 HSCCC分離效率高，產品純度高; 載體不會對樣品進行吸附和汙染; 製備量大，溶劑消耗量低; 它易於操作，可以從非常複雜的混合物中分離出特定成分。

HSCCC在天然產物分離中的應用可以實現：（1）製備必須控制的藥用成分和雜質的高純度對照物質; （2）配合活性跟蹤和藥物部位的設計，逐步分離配製活性部分或活性成分; （3）建立中藥材指紋和中藥配方，以提供更豐富的資訊和資料; （4）進行試產和工業化生產。 例如，中科院工程研究所探索了利用HSCCC開發中藥指紋圖譜的方法，以Salvia miltiorrhiza的原始藥材為模式，初步建立了Salvia miltiorrhiza的HSCCC指紋圖譜。

該技術有望成為研究中藥有效成分質量標準的新方法和中藥生產的新型分離技術。

在《色譜世界》的學習培訓欄目裡，有詳細的系統介紹高速逆流色譜的知識，大家可以看看。

高速逆流色譜（HSCCC）是美國國立衛生研究院ITO博士於1982年研製的一種新型、連續、高效的液-液分布層析技術。

由於它不同於一般的色譜分離方法，它可以實現梯度洗脫和反相洗脫，也可以進行重複進樣，使其特別適合製備分離，產品純度高，製備體積大。

（1）天然產物已知活性成分的分離純化。

2）化學合成物質的分離和純化。

3）中藥I類、V類新藥的開發。

4）中藥指紋圖譜與質量控制研究。

5）抗生素的分離純化。

6）天然產物中未知活性成分的分離和純化（新化合物的開發）和（7）海洋生物活性成分的分離和純化。

8）放射性同位素分離。

9）多肽、蛋白質等生物大分子的分離，以及手性分離等。