BCA蛋白濃度檢測實驗試劑

雙辛可寧酸 （BCA） 方法是對 BCA 方法的改進，BCA 方法是世界上常用的蛋白質濃度測試方法之一。 其原理與Lowery法進行蛋白質定量的原理相似，即在鹼性環境中，蛋白質與Cu2+絡合，Cu2+還原為Cu2+，BCA的兩個分子與Cu+螯合，形成穩定的紫藍色絡合物，在562nm處具有較高的吸光值，與蛋白質濃度成正比， 據此可以確定蛋白質濃度。

組成與儲存：

元件名稱規範儲存。

bca reagent 100ml 2-8℃cu reagent 2-8℃

BSA標準溶液5mg ml 1ml-20°C冷凍儲存。

可以進行500 T微孔板測定或50 T 2 ml比色皿測定。

1）BCA試劑的製備。

試劑A，1L：稱取10g BCA（1%）、20g Na2CO3·H2O（2%）、Na2C4H4O6·2H2O（、4gNaOH（ 加水至1L，用NaOH或固體NaHCO3調節pH值至。

試劑B，50ml：取CuSO 4·5H 2 O（4%）2g，加蒸餾水至50ml。

BCA試劑：取試劑A50份，與試劑B的1份充分混合。 該試劑可穩定儲存一周。

2）標準蛋白溶液：稱取牛血清白蛋白，溶於蒸餾水中，定體積為100ml，製成5mgml溶液。使用時稀釋十倍。

BCA方法是蛋白質濃度的量度，但在實踐中，它可能會導致各種錯誤。

1.操作誤差：試劑使用不當、攪拌不當、沉澱殘留、操作的時間和溫度等因素都會影響測量結果的準確性。

2.反應性差異：不同蛋白質對BCA試劑的反應性可能存在差異，這可能導致某些蛋白質表現出較低的吸收值偏倚。

3.干擾物質：某些抗生素、膽固醇、紅細胞裂解物等會干擾測量結果，導致測量誤差。

4.蛋白質分子構象：蛋白質的空間構象可能會影響BCA試劑的反應性，從而導致測量誤差。

5.其他因素：樣品的清潔度、pH值、離子強度等因素也可能對測量結果產生影響。

因此，在用BCA測量蛋白質濃度時，需要注意操作規範，控制干擾物質，並選擇合適的標準曲線以減少誤差。

1.根據試樣數量，按50體積的BCA試劑A和1體積的BCA試劑B（50：1）配製適量的BCA工作液，混勻。 BCA工作液在室溫下24小時內穩定。

溶液的濃度取決於溶解在溶劑中的物質量。 溶解度。

它是溶劑在特定溫度下可以溶解的最大物質量。

當蛋白質濃度超過範圍時，BCA方法肯定是不準確的，過量範圍一般超過標準曲線的最高點。

利脲法首先通過比色法測定蛋白質濃度，硫酸銨不干擾顯色，Cu2+與蛋白質的肽鍵以及酪氨酸殘基絡合形成紫藍色絡合物，在540 nm處吸收最大。 縮二脲法常用於測定蛋白質溶液的含量。

是細胞內蛋白質切割後的測試嗎？ 可根據以下幾點排除：

單獨測量裂解物時，紫外線吸收值也很高。

是否帶入細胞膜碎片。

提取濃度因子是否過大。

蛋白質定量BCA法原理：在鹼性環境中，蛋白質與Cu2+絡合，將Cu2+恢復為Cu1+。 BCA與Cu1+結合形成穩定的紫藍色複合物，在562nm處具有高光吸收值，並且與蛋白質濃度成正比，從中可以確定蛋白質濃度。

1.BCA法受反應溫度和反應時間的影響很大。 特別是反應時間，通常大約每 10 分鐘增加一次。

2.當樣品中含有脂質時，BCA方法的測量結果會更高。 BCA方法不能用於蛋白質樣品中EDTA或葡萄糖濃度大於10 mM。

3.標準曲線漂移較大，因此每次測量應準備單獨的標準曲線。

當蛋白質濃度超過範圍時，BCA方法肯定是不準確的，過量範圍一般超出標準曲線。

最高點。 縮二脲法是第一種通過比色法測定蛋白質濃度的方法，硫代銨。

在不干擾顯色的情況下，Cu2+ 與蛋白質的肽鍵以及酪氨酸殘基絡合物形成紫藍色絡合物，其在 540 nm 處具有最大吸收率。 縮二脲法常用於測定蛋白質溶液的含量。

BCA法是一種用於根據蛋白質與銅（）離子發生化學反應形成的物質的吸光度來確定蛋白質濃度的方法。 以下是可能影響BCA測定蛋白濃度的因素：

1.對樣品的干擾：如果樣品清潔不充分或存在其他雜質，可能會干擾化學反應並導致檢測結果不準確。

2.pH值：根據BCA方法的原理，需要正確的pH值才能將猜滑銅（）離子降低到銅（）離子。 同時，樣品的pH值也會影響反應的效率。

3.還原劑濃度：還原劑濃度高或低都可能影響反應效果。 一般情況下，還原劑的濃度應在適當的範圍內。

4.離心：加入還原劑後，需要對樣品進行離心，使沉澱沉降到底部。 如果離心時間太短或轉速太低，可能會影響分析結果。

5.讀數時間：對於BCA方法，重要的是在反應完成後進行讀數。 如果吸光度沒有在正確的時間讀取，可能會導致結果有偏差。

6.其他因素：其他因素可能包括不同**製造商提供的試劑以及試管開口、溫度等的批次變化。

這個原則也被其他人引用。

我用過BCA實際的盒子，它確實比考馬斯亮藍試劑靈敏得多。 它也很容易操作。

原理介紹。 BCA（Bicinchoninic Acid）蛋白質濃度定量試劑盒是BCA方法的改進版本，BCA方法是世界上常用的蛋白質濃度檢測方法之一。 眾所周知，二價銅離子在鹼性條件下可被蛋白質還原為縮二脲反應，一價銅離子與獨特的BCA溶液A（含BCA）相互作用，產生靈敏的顏色反應。 BCA的兩個分子螯合銅離子形成紫色反應性絡合物。

這種水溶性複合物在562 nm處表現出很強的吸光度，並且在很寬的範圍內吸光度與蛋白質濃度之間存在良好的線性關係，因此蛋白質濃度可以從吸光度值推斷出來。

特徵： 1 程式簡單，45分鐘即可完成檢測，比經典Lowry方法快4倍，更方便。

2 靈敏度高，檢測濃度下限達到25 g ml，達到最小檢測蛋白量，待測樣品體積為1-20 l。

3 BCA方法在大多數樣品中不受洗滌劑等化學物質的影響，並且與樣品中高達5%的SDS、5%的Triton X-100和5%的吐溫20、60和80相容。

4 在20-2000 g ml的濃度範圍內具有良好的線性度。

5.不同蛋白質分子的變異係數遠小於考馬斯亮藍蛋白質定量。