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一般來說,只要是溶解性好的藥物,在配製介質的過程中攪拌均勻,可以保證藥物能均勻溶解在介質中。 即使是不易溶解的藥物,在高壓滅菌過程中,藥物的溶解度也會隨著溫度的公升高而增加,滅菌後,輕輕搖動錐形瓶,以進一步保證藥物在培養基中混合。
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以 50 1050 的比例製備 50 ml 完全培養基。
在基礎培養基中加入血清、抗生素等物質後,稱為完全培養基,又稱(血清)細胞培養基。 基礎培養基只能維持細胞存活,為了使細胞生長繁殖,就需要新增天然培養基,常用的是牛血清,因為牛血清中含有各種促進細胞增殖的生長因子和多種其他有利於細胞存活的物質。
培養基
由於配製的原料不同,使用要求也不同,貯存和貯存方面也略有不同。 一般介質經過加熱吸收後,容易被細菌汙染或分解,因此一般介質必須存放在防潮、避光、陰涼的地方。 對於一些需要嚴格滅菌的培養基(如組織培養基),必須長期存放在冰箱中。
由於液體介質不易長期儲存,因此被改性為粉末。
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1. 準備溶液。
加入一部分所需量的水,按介質的配方稱取各種原料,依次加入溶解,最後補配出所需的水。 對於蛋白腖、肉醬等物質,需要加熱溶解,加熱過程中蒸發的水分應在原料全部溶解後補充水分。
配製固體培養基時,先將上面已配製好的液體培養基煮沸,然後加入稱好的瓊脂,繼續加熱至完全融化。 並不斷攪拌,使瓊脂糊的底部不會燃燒。
2.調整pH值。
用pH試紙(或pH電位器或氫離子濃度色度計)測試介質的pH值,如果不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH調節,直至調整配方所需的pH值。
3.過濾。 趁熱過濾準備好的培養基,用濾紙、紗布或棉花過濾。 用紗布過濾時,最好將其摺疊成六層,用濾紙過濾時,可將濾紙摺疊成瓷磚稜柱形,鋪在漏斗上進行過濾。
4.包裝。 過濾後的培養基應等分。 如果要製作斜面介質,則必須在試管中等分介質。 如果要製作平板培養基或液體、半固體培養基,則必須在錐形瓶中等分培養基。
分液時,乙隻手捏鬆彈簧夾,讓培養基流出,另乙隻手握住幾個試管或錐形瓶,依次拿起培養基。 分液時,注意不要讓介質粘附在管或瓶口,以免浸泡衛生棉條,造成細菌汙染。
要載入到試管中的培養基量取決於試管和錐形瓶的大小和需求。 一般來說,在製作斜面培養基時,每15 150 mm管應填充約3 4 ml(1 4 1 3管高度),如果製成深介質,則每20 220 mm管應填充約12 15 ml。 每個錐形瓶中所含的培養基通常為其體積的一半。
5.新增衛生棉條。
點膠完成後,需要用衛生棉條堵住噴嘴或瓶口。 衛生棉條的主要目的是過濾空氣,避免汙染。 衛生棉條應採用普通的新鮮和乾燥棉製成,不要使用脫水棉,以免因吸納脫脂棉而使衛生棉無法使用。
製作衛生棉條時,根據衛生棉條的大小將棉花鋪成合適的厚度,取一塊手掌大小的棉條,鋪在左手拇指和食指形成的圓孔中,用右手食指插入棉花的中間, 同時輕輕握住左手食指,會形成乙個長長的棒狀衛生棉條。
衛生棉條製作完成後,應迅速插入噴嘴或瓶口,衛生棉條應緊貼內壁,不留縫隙,防止空氣中微生物沿褶皺侵入。 衛生棉條不宜過緊或過鬆,塞好後,適當防止手持衛生棉條、管子和瓶子掉落。 衛生棉條的2 3應放在管子或瓶子裡,上端露出少許棉布,方便拉扯。
帶有衛生棉條的試管和錐形瓶應用厚紙覆蓋並用繩子綁住並準備滅菌。
6.製作傾斜介質和板式介質。
介質滅菌後,如果製作了傾斜介質和板式介質,則應在介質未凝固的情況下進行。
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(個人原創總結)。
雖然培養基的種類很多,但製備過程和步驟基本相同。 大致的製備步驟如下:
1.根據組合物準確稱量,懸浮在裝有蒸餾水的燒瓶中,加熱溶解;
2.調節介質的pH值;
3.過濾澄清; 配製的培養基會產生沉澱或渾濁,需要過濾澄清,有利於觀察細菌生長。
4.分裝:將配製好的培養基按實際使用需要分配。
在試管中,可製成瓊脂斜面、半固態培養基、瓊脂層、液體培養基等; 基礎培養基可以儲存在大瓶中,以備後用。 一些培養基在滅菌後需要無菌分裝,例如瓊脂平板。
5.滅菌:配製的培養基在使用前必須進行滅菌。 根據介質的成分和性質採用不同的滅菌方法,常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、流動蒸汽間歇滅菌和血清凝血器滅菌。
6.質量檢驗 所有製造的介質必須通過質量檢驗才能使用。 至少應進行無菌測試和效力測試。
7.貯存 配製的培養基應標明名稱和配製日期,並貯存於陰涼避光處或4冰箱內。 盤子應倒置。 培養基不應存放太久。
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完全培養基又稱總營養培養基,是一種營養成分完全、比例適中的培養基。
用途不同,完全培養基的配方也不同,如用於細胞培養、植物組織培養、微生物培養等,各有不同的完整培養基配方。
以下是用於微生物培養的完整培養基配方。
蛋白腖酵母提取物葡萄糖氯化鈉5g,瓊脂加入1000ml蒸餾水中,煮沸溶解,調節pH值,然後在121滅菌15min,取出,稍冷,倒入培養皿中加熱。
1.母液和母液的製備方法如下:稱取每份母液中的幾種組分後,用少量蒸餾水充分溶解,然後混溶,最後將體積固定為1公升。 >>>More
培養基。 製備完成後,必須立即滅菌,以防止細菌汙染培養基。 一旦細菌汙染了培養基,由於培養基中營養成分豐富,細菌會在一段時間內大量產生,並且會與培養物爭奪營養物質,另一方面,細菌在生長過程中會產生有毒物質,導致培養物死亡,如果不能立即滅菌, 它必須無菌且無毒地重新滅菌。 >>>More