培養基、培養用具和植物材料通常如何滅菌

培養基。 製備完成後，必須立即滅菌，以防止細菌汙染培養基。 一旦細菌汙染了培養基，由於培養基中營養成分豐富，細菌會在一段時間內大量產生，並且會與培養物爭奪營養物質，另一方面，細菌在生長過程中會產生有毒物質，導致培養物死亡，如果不能立即滅菌， 它必須無菌且無毒地重新滅菌。

一般在相對成熟的條件下，在高壓滅菌前將培養基的pH值提高一定量，以適應滅菌後pH值下降的問題。

一種培養基的滅菌方法。

1.高壓滅菌器滅菌

高壓滅菌器滅菌適用於高溫介質、接種裝置、蒸餾水的滅菌。 培養基在製備過程中混入各種雜菌，包裝後應立即滅菌，滅菌至少應在24小時內完成。 滅菌一般在壓力下進行，當溫度為121時，滅菌可進行15-30min。

消毒時間不宜過長，也不應超過規定的壓力範圍，否則有機物，特別是維生素，在高溫下會分解，失去營養作用，還會使培養基變質、變色，甚至難以凝固。 將蒸餾水或自來水裝在三角瓶中，水量一般不超過瓶子的2 3，用牛皮紙或硫酸紙包好密封，然後放入高壓鍋中殺菌，即為無菌水。 滅菌後的培養基可在培養室預孵育3天，如果沒有汙染，則證明滅菌徹底，可以使用。

最好將暫時未使用的介質存放在 10 點。 含有IAA或GA3的培養基應在1週內用完，其他培養基的用完時間不超過1個月。

2.過濾和殺菌

一些植物生長調節劑和有機物，如IAA、GA3、ZT、CM等，受熱易分解，不能用高溫介質殺菌，但應用細菌過濾器過濾掉。 細菌過濾器和膜（孔徑微公尺）在使用前經過高壓滅菌。 過濾後的溶液應立即加入介質中，如果是液體介質，可在介質冷卻至30時加入; 對於固體介質，必須在介質凝固（50-60）之前新增它，並搖晃以將溶液與其他組分混合。

根據培養基的組成選擇滅菌方法。

1.如果培養基中的所有組分都能承受高溫，請用高壓滅菌將其高壓滅菌：121 或 115 高壓滅菌 30 分鐘。

2.如果培養基中的某些成分不耐高溫，您可以通過通過滅菌過濾器過濾培養基來對它們進行滅菌。

3.如何不苛刻，一些測試介質可以通過煮沸進行滅菌。

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普通培養基的滅菌應分批滅菌。

分餾滅菌使用重複迴圈蒸汽加熱來殺死所有微生物，包括孢子。 該方法與流動蒸汽滅菌法相同，但應重複3次以上，每次間隔將待滅菌的物件放入馬鈴薯派敏37培養箱過夜，使孢子發育成繁殖體。 如果滅菌材料不耐100°C，溫度可降低到75-80°C，加熱時間可延長至30-60分鐘，次數可增加。

它適用於含糖或牛奶的介質，不耐高溫。

培養基是指將不同營養素和鉛物質結合製備起來，用於微生物、植物或動物（或組織）的生長和繁殖的營養基質。 一般含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽（含微量元素）、維生素和水。 培養基不僅是提供細胞營養、促進細胞增殖的基礎物質，也是細胞生長繁殖的生存環境。

培養基的種類很多，按原料的製備可分為天然培養基、合成培養基和半合成培養基; 按物理狀態可分為固態介質、液體介質和半固態介質; 按培養功能可分為鹼性培養基、選擇培養基、富集培養基、鑑別培養基等。 按使用範圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母培養基、真菌培養基等。

培養基製備好後，通常對pH值進行測試和調節，並進行滅菌，通常進行高壓滅菌和過濾滅菌。 由於其營養成分，培養基容易受到汙染或變質。 匹配後不宜長時間放置，最好現在就使用。

培養皿殺菌方法有乾熱殺菌和濕熱殺菌，乾熱殺菌法：用鐵容器包裹，高溫烘烤。 用牛皮紙包裹，然後在高壓鍋中用濕熱高壓滅菌。

介質滅菌方法有濕熱滅菌、煮沸滅菌和過濾滅菌，沸騰滅菌可在電磁爐或微波爐中煮沸，過濾滅菌適用於高溫下無法處理的培養物。

培養皿一般用乾熱滅菌，一般用乾熱空氣滅菌：用牛皮紙包好培養皿，放入烘箱中烘烤170小時，持續2小時。

培養基一般用濕熱滅菌，一般採用高壓滅菌器：將培養基放入錐形瓶中，用棉塞和牛皮紙包裹，放入高壓滅菌器中，設定12120分鐘。

1.濕熱滅菌。

通過加壓提高蒸汽溫度，用高壓釜滅菌，滲透力強，耐高溫，殺菌效果最佳。

注：1完全去除高壓滅菌器內的冷空氣。

在冷空氣存在下，在相同表壓下達到的溫度值較低，排出的冷空氣越少，溫度越低。 在高壓滅菌中，必須完全去除冷空氣，以確保達到規定的溫度。 否則，雖然達到壓力，但溫度不符合規定要求，滅菌就不徹底。

2.紫外線殺菌光譜寬，但穿透力弱，影響因素多，殺菌效率在一定程度上受到限制。

紫外線消毒的效果與紫外線強度、照射時間、溫度和濕度等因素有關。

我國規定，紫外線燈在1m距離內的照射強度不應小於70W cm2一般來說，如果使用超過100h，應更換紫外線燈。 表面有灰塵，降低殺菌效果。

紫外線燈殺菌溫度應為20°40，相對濕度為40%60%。

3.乾熱殺菌。 火焰殺菌通常用於無菌操作，試管口、玻璃瓶口、矽氟塑料塞等反覆穿過火焰數次，噴頭利用火焰進行滅菌，防止噴頭被汙染，作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。

4、幹烘殺菌：採用熱輻射和乾熱風進行殺菌。 一般來說，金屬、玻璃、陶瓷製品等待滅菌的物品，包裝後即可在烘箱中烘乾滅菌。

通常加熱至160°C，保溫2h即可完全滅菌。 但不應超過170，玻璃量具容易變形。 如果冷卻太快，淬火很容易導致玻璃器皿爆裂。

幹烘箱中的物品在乾熱殺菌時不宜過緊，應有間隙，有利於熱空氣的流動，且密度過大，導致部分物品溫度不均，殺菌不完全。

植物組織培養不需要 CO2 培養箱。